金 宏 刘 威 温 娜 纪朋艳 王 爽 齐 玲 刘晓阳

(吉林医药学院基础医学院，吉林 吉林 132013)

神经胶质瘤在颅内肿瘤中发病率较高，目前治疗方法主要以手术为主，辅以放化学治疗，但都效果不佳，术后复发率、死亡率很高。其中位生存期<1年，且大多数患者在确诊后 2 年内死亡〔1〕。五味子作为补益类中药，在护肝、提高免疫、抗肿瘤与抗氧化等方面已受到多项证实。研究表明，木脂素是五味子中主要生物活性成分〔2，3〕，但其对脑胶质瘤中治疗作用研究较少。本研究观察了五味子木脂对体外培养裸鼠神经胶质瘤细胞生长的作用，旨在探讨五味子木脂素在脑肿瘤细胞生长中起到的作用。

1 材料与方法

1.1主要试剂 细胞培养基RPMI-1640 (Thermo)，小牛血清(Gibco)，五味子木脂素(北华大学提供)，木瓜蛋白酶(北京鼎国)，四甲基耦氮唑蓝(MTT)(Sigma)，二甲基亚砜(DMSO)(Thermo)。

1.2提取原代裸鼠胶质瘤细胞 取新鲜的裸鼠神经胶质瘤组织，冰上操作，剔除坏死出血部分，冷磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，将组织剪成1×1 mm2碎块，置于离心管中，加入木瓜蛋白酶后将离心管置于37℃培养箱中，消化30 min，吸取上清液，加血清终止消化，以300 r/min离心5 min，弃上清后加培养液反复吹打，过滤后以300 r/min速度离心5 min，离心再次弃上清，加入含10%血清培养液培养，台盼蓝计数活细胞，以2×106将细胞接种于25 cm2培养瓶中，37℃、5% CO2及饱和湿度下培养待用。

1.3培养裸鼠胶质瘤细胞 将提取细胞接种于培养瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的RPMI-1640细胞培养液，将其置入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，隔日换液，待细胞汇合度为 80%～90% 时，用0.25%胰酶消化传代，取传3代以后对数生长期细胞进行实验。

1.4药物作用后胶质瘤细胞生长情况 将五味子木脂素溶解后，取适量药液加入含5%小牛血清RPMI-1640细胞培养液，配制成终浓度为0、50、100、200 μg/ml的药物。将裸鼠胶质瘤细胞，用胰酶消化后，用含5%小牛血清RPMI-1640细胞培养液调整细胞浓度为1×106/ml。将细胞悬液均匀接种于96孔板中，100 μl/孔，置入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养24 h，使细胞同步化。分别于24、48、72 h弃去上清液，加入含不同浓度的五味子木脂素，每个药物浓度重复5次。……