邢恩鸿 田建丽 王爱霞 王瑞婷

(承德医学院附属医院，河北 承德 067000)

淀粉样蛋白(Aβ)作为阿尔茨海默病(AD)发病的始动因子已得到认可。炎症反应在AD中的作用越来越受到关注。流行病学研究发现，长期服用非甾体抗炎药(NSAIDs)的老年人AD发生率明显降低。Leuchtenberger等〔1〕研究发现，给予NSAIDs后AD模型动物脑内Aβ沉积和活化态小胶质细胞的数量均明显减少，脑内炎性反应明显减轻。本实验通过大鼠双侧海马注射Aβ制作痴呆模型，采用免疫组化、ELISA等技术探讨炎症因子、胶质细胞在AD发生中的作用，为抗炎药物用于AD的治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1实验动物分组及处理 雄性Wistar大鼠20只，10～12 w,体质量(280±20)g,动物证号712123，由河北省实验动物中心提供，清洁级。分笼饲养，每笼5只动物室温度(22±2)℃，自然光线，自由食水，普通饲料，适应性喂养1 w，随机分为对照组、实验组，各10只，对照组大鼠海马注射生理盐水，模型组大鼠双侧海马各注射Aβ 5 μl含10 μg,注射7 d后进行水迷宫实验，连续测6 d，于第14天，处死，取血、脑组织。

1.2试剂 Aβ25～35购自Sigma公司，HPLC≥97%，1 mg溶于500 μl无菌生理盐水(2 g/L),-20℃保存，临用前置于37℃孵育7 d成凝胶态。大鼠血清TNF-α(RRA00)，IL-1β(RTA00)ELISA试剂盒由R&D提供,山羊抗兔GFAP 多抗(G9269)购自中杉公司，其他试剂为分析纯。

1.3痴呆动物模型制作 4%的水合氯醛腹腔麻醉(1 ml/100 g)大鼠，固定于大鼠脑立体定位仪，于大鼠AP -3.5 mm，ML ±2 mm，DV 2.7 mm定位海马CA1区，微量注射器10 min内缓慢注入Aβ。

1.4Morris水迷宫行为学实验 圆形不锈钢水池，直径120 cm,高60 cm，将水池等分为4个象限，目标象限的中央放置一直径为10 cm，高23.5 cm的圆形隐藏平台，每天将大鼠从4个象限点面向池壁各测验2次，记录动物寻找并爬上平台所需时间，如果动物在60 s内未找到平台，潜伏期记为60 s。……