黄 波 王晓东 郎贤平

(辽宁医学院附属第一医院胸外科，辽宁 锦州 121000)

小细胞肺癌(SCLC)是一种特殊类型的肺癌，占肺癌的15%～20%。SCLC侵袭性强，生长迅速且早期容易出现远处转移〔1〕。虽然SCLC对化疗和放疗敏感，但它容易复发和耐药。因此寻找SCLC的相关基因尤显重要。富含AT-序列结合蛋白1(SATB1)是一种核基质结合区结合蛋白，参与染色质合成和组织特异性基因表达〔2〕。 SATB1主要表达在胸腺细胞其调控T细胞的发育与成熟〔3〕。 有报道显示SATB1与乳腺癌的转移及预后不良有一定的相关性〔4〕。RNA干扰SATB1可引起侵袭性较强的癌细胞超过1 000个基因的表达改变，并能有效地抑制细胞的增殖，侵袭，肿瘤的生长和转移。SATB1-RNAi技术已证实其对于肝癌细胞、胃癌细胞等肿瘤细胞的侵袭能力均有一定的抑制作用〔5～9〕，而在SCLC细胞中SATB1基因的干扰RNA的效果尚缺乏报道。本研究将针对SATB1-siRNA对SCLC的作用进行初步探讨。

1 材料和方法

1.1材料 人SCLC细胞株NCI-H446由中国科学院细胞库引进。新生小牛血清购于杭州四季青公司，RPMI-1640培养基和lipofect2000购于美国invitrogen公司。pRNAT-U6.1/Neo购于上海闪晶生物公司，大小6.4 kb。携带有绿色荧光蛋白报告基因，其两端分别带有BamH I和EcoR I.酶切位点。菌株JM109、DH5α均购于大连宝生物公司。引物设计、合成以及测序由大连宝生物公司完成。SATB1-siRNA-1，SATB1-siRNA-2为RNA干扰序列，SATB1-siRNA-N为无意义干扰序列。

1.2siRNA载体构建 将合成的SATB1基因的siRNA引物si-1正义链：5'-GATCCCCGGATTTGGAAGAGAGTGTCTTCAAGAGAGACACTCTCTTCCAAATCCTTTTTGGAAA- 3'；反义链：5'-AGCTTTTCCAAAAAGGATTTGGAAGAGAGTGTCTCTCTT GAAGACACTCTCTTCCAAATCCGGG-3'；si-2正义链：5'-GATCCCCGTCCACCTTGTCTTCTCTCTTCAAGAGAGAGAGAAGACAAG GTGGACTTTTTGGAA A-3'反义链：5'-AGCTTTTCCAAAAAGTCCACCTTGTCTTCTCTCTCTCTTGAAGAGAGAAGACAAGGTGGAC GGG-3'；si-N正义链：5'-GATCCGCGAGACCTCAGTATGTTACCTGTGAAGTAACATACCACAGATGGGGCTGAGGTCTCGCTTTTTTG-3'。退火并将退火产物与RNAi-Ready pSIREN-DNR载体4℃过夜充分连接。热转化至DH5α中，分别命名为SATB1-siRNA-1，SATB1-siRNA-2，SATB1-siRNA-N，涂布平板后，37℃过夜培养。从转化平板上挑取阳性单菌落，进行扩增，检测阳性克隆，并测序。……