杨吉平 费 琳 张军峰 赵朝华 徐 曦

(西安医学院基础医学研究所，陕西 西安 710021)

阿尔茨海默病(AD)最显著的神经组织病理学特征是神经细胞之间存在大量的老年斑(SP)和神经细胞内存在神经原纤维缠结(NFT)。关于AD 的发病机制有淀粉样蛋白(Aβ)级联假说、tau 蛋白异常假说、凋亡假说、胆碱能假说以及自由基损伤假说等，但其确切的发病原因目前还不十分明确。小檗碱又称黄莲素，是从毛茛科植物黄连、三角叶黄、云连的干燥根茎中提取的一种异喹啉类生物碱，是我国历史悠久的传统药物的主要成分，临床上主要用于治疗胃肠道疾病。近年来随着对小檗碱药效作用的深入研究，发现小檗碱在体内、外均具有抑制多种肿瘤细胞增殖的作用〔1〕。此外，小檗碱对于治疗神经退行性疾病的潜力越来越受到关注〔2，3〕。本实验用Aβ25～35诱导损伤原代培养的大鼠海马神经元，复制AD 细胞模型，观察小檗碱的神经保护作用。

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器 DMEM/F12培养基购自武汉博士德生物工程有限公司，胰蛋白酶购自Beyotime 公司，噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司，Aβ25～35及阿糖胞苷购自Sigma 公司，Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒购自上海美季生物技术有限公司，兔抗大鼠Cleaved caspase-3(Asp175)购自Cell Signaling Technology、抗 β-actin 及山羊抗兔IgG (FITC) 购自Santa Cruz公司，小檗碱购自中国药品生物制品检验所 (批号：1107132200218)。

1.2大脑海马神经元的原代培养 取出生24 h Wistar大鼠，用75%乙醇浸泡消毒，无菌条件下分离出海马组织，置于冰浴 PBS 液中，小心剔除血管及筋膜，用PBS 液冲洗干净，剪碎。然后加入30倍组织体积的2.5 g/L胰蛋白酶液，37 ℃振荡消化15 min，FBS液终止消化，过75 μm筛网。……