殷旭华 李冬梅 于慧玲

(内蒙古医科大学附属医院神经内科，内蒙古 呼和浩特 010050)

脑出血是发病率和致死率极高的脑血管疾病之一〔1〕。脑出血后轻微脑缺血伴随着大量激活的细胞因子外渗及血肿周围神经元死亡，是脑出血后神经细胞死亡的主要途径之一〔2〕。因此如何阻断脑出血后神经细胞凋亡成为研究热点，本实验探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α和线粒体细胞色素(Cyt)-C在脑出血大鼠脑组织中的表达及与脑神经细胞凋亡之间的关系。

1 材料与方法

1.1实验动物 健康的Wistar老年雄性大鼠(20月龄)120只(吉林大学基础医学部动物实验中心提供，动物许可证号：SCXK2007-吉大-0003)，体重(370±20)g。

1.2实验试剂及仪器 HIF-1α、Cyt-C的ELISA试剂盒购于南京建成生物有限公司；Trizol、HIF-1α和Cyt-C的引物、反转录试剂盒均购于Takara生物有限公司。Biotek Epoch酶标仪(美国)；实时荧光定量PCR仪(型号ABI7300，美国)；Biometra PCR扩增仪(美国)；脑立体定位仪(NARISH IGE SN-3型)。

1.3脑出血模型制备〔3〕采用自体尾动脉血尾状核定位注入法建立脑出血模型。动物称重后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.4 ml/100 g)。麻醉成功后，固定大鼠，在脑立体定位仪引导下用微量进样器向尾状核(以前囟为原点R 3.0 mm，A 0.2 mm，H 5.0 mm)注入自体不加抗凝剂的尾动脉血50 μl。假手术组:尾状核部位打孔进针、不注血，其他同模型制备。

1.4实验分组 随机分为假手术组和脑出血模型组各60只；两组按时间点分组：12、24、48、72 h、5和7 d组(n=10)。

1.5大鼠脑组织中HIF-1α、Cyt-C蛋白含量的检测 采用ELISA法检测，严格按试剂盒说明书操作。

1.6大鼠脑组织中HIF-1α、Cyt-C mRNA水平的检测 取冷冻脑组织60～100 mg，用Trizol提取总RNA，应用实时多聚酶链反应(RT-PCR)法测定HIF-1α、Cyt-C mRNA的表达。……