张明惠 杜新平 姜忠敏 李艳霞 盛 凤 刘晓智

(天津市第五中心医院心内科，天津 300450)

干细胞凭借其多组织分化潜能，成为当前医学界多学科研究热点〔1～3〕。各学科在积极尝试将干细胞诱导分化为各自所需的组织与器官时，由于常带有明确的目的性和方向性，诱导方法的选择和实施差别较大，较难比较干细胞在同一干预条件下的横向分化潜能和特征〔4〕。最近有学者报道将干细胞移植到特定物理密度的材料表面时，干细胞有顺材质硬度分化的特性〔5〕。基于此，本研究借助低熔点琼脂设计出一种低密度介质，研究脐带间充质干细胞在该介质中的生长状态和组织分化特点，尝试利用物理干预手段实现干细胞向心肌组织的横向分化，为未来心肌组织工程研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1试剂和动物 胎牛血清(杭州四季青产品)，达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)、胰蛋白酶(美国Gibco公司)，低熔点琼脂糖(北京中杉公司)，异硫氰酸荧光素标记流式抗体CD29、CD31、CD44、CD45和CD105(英国Serotec公司)，抗小鼠CD34抗体(美国Santa Cruz公司)，抗小鼠心肌特异性基因肌球蛋白重链α(α-MHC)和抗小鼠心脏特异性肌钙蛋白T(cTnT)抗体(美国Santa Cruz公司)；PCR引物由北京赛百胜公司合成，RT-PCR试剂盒购自美国Qiagen公司。清洁级1周龄雄性SD大鼠5只用于BMSCs原代培养。动物由天津医科大学实验动物中心提供，饲养于天津市血液病研究所动物实验中心。

1.2骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离、培养 雄性SD大鼠拉颈处死后，置于75%酒精中浸泡消毒5 min。无菌条件下分离双侧股骨和胫骨，剪开长骨两端骨皮质，露出骨髓腔，用含10% FBS的低糖DMEM培养基反复冲洗骨髓腔，收集细胞悬液，接种到10 cm塑料培养皿，37℃、5%CO2、饱和湿度条件下细胞培养箱中培养。……