刘雅娟 郭 丽 张桂英 孙 擎 邵梦楠

(吉林大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室，吉林 长春 130021)

1型糖尿病是由T细胞介导的自身免疫性疾病，以胰岛β细胞的破坏为特征，每日注射胰岛素可以缓解病情；β细胞移植也是一种治疗方法，但是存在供体不足和免疫排斥的问题〔1〕。骨髓间充质干细胞(BMSCs)免疫原性弱，静脉移植后可以定位在受损部位并分化成该部位的细胞修复损伤。以往发现体外诱导BMSCs分化成胰岛样细胞，移植到糖尿病模型大鼠肾被膜下可以治疗糖尿病〔2〕。也有研究者发现BMSCs不分化成胰岛样细胞，直接静脉移植也可以治疗糖尿病〔3,4〕，但是静脉移植多少细胞能有效治疗糖尿病报道较少。本文拟探讨不同数量的BMSCs静脉移植进老年糖尿病大鼠体内对糖尿病的治疗作用。

1 材料与方法

1.1材料 Wistar大鼠；胎牛血清、DMEM培养液 (美国Gibco公司)、帕可尔(Percoll)分离液、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、链脲佐菌素(STZ )(美国Sigma公司)；人白细胞抗原-B27、胎牛血清、活化素、胰岛素、地塞米松(国产)。

1.2胰腺条件培养液制备 20只周龄Wistar大鼠，处死，无菌条件下取胰腺组织，匀浆器研磨，离心取上清，-70℃反复冻融，1 500 r/min离心10 min，去上清冻存备用。

1.3大鼠BMSCs、分离、扩增培养与鉴定 采用本实验室常规培养、扩增法〔5〕。将周龄大鼠脱臼处死，消毒、无菌条件下取股骨，用DMEM(低糖)培养液反复冲洗髓腔，制备单细胞。加等体积的Percoll分离液，2 000 r/min离心20 min，收集细胞的界面层，分离的骨髓有核细胞按1×106/ml的密度接种于25 cm2的塑料培养瓶中，将细胞置于5%CO2，饱和湿度的37℃孵箱中培养。……