刘 培 李 雪 焦 展 邵铁梅 仵 陶 温 昕 陈晓威 安胜军

(河北省高校生物反应器与蛋白类药物开发应用技术研发中心 河北化工医药职业技术学院，河北 石家庄 050026)

血管外膜成纤维细胞的增殖、迁移及转化在血管重构的发生发展中扮演着重要角色。血管损伤后发生的管壁结构重塑是血管重建后再狭窄、动脉粥样硬化等多种心血管疾病发病的共同病理基础〔1〕。An等〔2〕曾报道血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能够刺激血管外膜成纤维细胞中内皮素-1的合成和释放，并促进胶原生成，从而导致胶原沉积。前期研究表明〔3,4〕成纤维细胞可分为纺锤形细胞(SC)和圆形细胞(RC)两个亚群，并发现两细胞亚群在细胞增殖、迁移和内皮素-1的合成方面存在显著性的差异。本实验旨在比较AngⅡ及其受体拮抗剂氯沙坦(Los)和PD123319的作用下，血管外膜成纤维细胞的两种亚群在细胞增殖和胶原合成方面的异同，探索两种细胞亚群在血管病理生理过程中的不同作用。

1 材料与方法

1.1实验用动物与主要试剂 SPF级SD大鼠，雄性，6～8周龄，购自河北医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK(冀) 2008-1-003。胎牛血清(FBS)购自Lonza BioWhittaker公司；DMEM/F12培养基和0.25%胰蛋白酶购自Gibco公司；TRIZOL购自Invitrogen公司；牛血清白蛋白(BSA)、Ang Ⅱ和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色液购自Sigma公司；兔抗鼠Ⅰ型胶原单克隆抗体、兔抗鼠β-actin单克隆抗体、羊抗兔IgG-HRP 购自Epitomics公司；引物购自上海生工生物技术有限公司；ECL显色液购自博彩公司；dNTP、TaqDNA聚合酶购自Promega公司；所用引物由上海生工生物技术有限公司根据设计合成，见表1。

表1 各基因引物序……