王 林 张秀艳 石国刚 于锦萍 陈 红 房 芳

(河北联合大学附属医院分院药剂科，河北 唐山 063000)

胰腺癌术后转移是胰腺癌手术切除治疗的难点。有报道胰腺癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)的阳性率接近50%，并参与了胰腺癌的发生、发展和转移。本文拟观察厄洛替尼对胰腺癌细胞生长、侵袭的影响及核转录因子(NF)-κB的表达变化。

1 材料和方法

1.1材料 人胰腺癌细胞株(PANC-1)购自中国科学院上海细胞生物学研究所。噻唑蓝(MTT)购于美国Sigma aldrich公司RAD001用二甲基亚砜(DMSO)配制成1 mmol/L贮备液，实验时用RPMI1640培养液稀释至实验所需浓度。

实验分为空白对照组、表皮生长因子(EGF)处理组、厄洛替尼处理组、EGF联合厄洛替尼处理组。EGF、厄洛替尼作用浓度分别为10 ng/ml、4 μmol/L。联合组为EGF先作用24 h后再加厄洛替尼作用4 h。

1.2方法 MTT比色法检测细胞增殖变化。调节PANC-1细胞浓度，以3×103/孔接种于96孔培养板中，每组设6个复孔，每孔加入MTT溶液(5 mg/ml)，37℃孵育4 h，轻轻吸弃培养液，每孔加入150 ml DMSO，振荡10 min，选择490 nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光密度(OD)值，计算各组细胞抑制率，抑制率=〔(空白对照组OD值-各实验组OD值)/空白对照组OD值〕× 100%。

Transwell体外侵袭实验：分别收集各处理组的PANC-1细胞培养上清液，置于8 μm孔径的Transwell板(购自Nunc公司)，于半透膜上层加入2×105PANC-1细胞系。4 h后于显微镜以不同高倍视野(5个高倍视野)下计数每个高倍视野平均细胞数。

Western印迹检测NF-κB的p65蛋白水平的表达。收集各组细胞，加裂解液冰上裂解，12 000 r/min离心10 min，取上清测定浓度后-80℃保存备用。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离，完毕后将蛋白转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。……