李素芬，郭尚敬

（1.聊城大学生命科学学院，山东聊城252000；2.聊城大学药学院，山东聊城252000）

全人源药用抗EGFR ScFv（HL-L-L）的构建、表达及抗肿瘤活性分析

李素芬1，郭尚敬2Δ

（1.聊城大学生命科学学院，山东聊城252000；2.聊城大学药学院，山东聊城252000）

目的对抗EGFR单克隆抗体重链可变区(VH）和轻链全长(L）经柔性肽链(linker）连接而成的单链抗体(VH-L-L）进行构建、表达及其抗肿瘤活性的分析，并对其进行生物信息学分析和相关谱学表征。方法通过OVER LAPING技术得到EGFR ScFv (HL-L-L）基因，然后构建原核表达载体pET-28a-c(+）-VH-L-L，经诱导表达、Ni柱纯化后得到目的蛋白HL-L-L，并对其利用SWISSMODEL进行三级结构预测；通过紫外扫描分光光度计，进行吸收波长的扫描；用NanoZSP表征目的蛋白VH-L-L的粒度和电位；随后利用药理学方法，研究HL-L-L对乳腺癌细胞的增殖抑制情况。结果成功构建了原核表达载体pET-28a-c(+）-VH-L-L；获得了较高纯度的VH-L-L蛋白，并成功预测了其三维结构；其粒度约为489.7 nm，Zeta电势为-38.1，带负电；HL-L-L对MCF-7具有一定的增殖抑制作用，与空白组相比差异有统计学意义(P＜0.01）。结论成功表达了全人源药用抗EGFR ScFv(HL-L-L），其对乳腺癌细胞的增殖抑制作用显著，为下一步研制抗EGFR的小分子抗体药物提供基础。

全人源；EGFR；ScFv；抗肿瘤

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是肿瘤治疗中一个很重要的靶分子，针对EGFR靶点的单链抗体药物的研究具有广阔的前景。EGFR是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白，与HER2/ErbB-2、HER3/ErbB-3和HER4/ErbB-4被归入HER/ErbB家族，同属于受体酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinases，RTKs）［1］。EGFR及其配体的信号传导网络在肿瘤形成和发展过程中起重要作用。EGFR信号转导系统中EGFR基因、配体以及下游的KRAS，BRAF和PIK3CA基因一直都是研究的热点［2］。……