刘仁同，魏春佩，刘素侠

（1.滨州医学院附属医院血液内科，山东滨州256600；2.滨州医学院附属医院检验科，山东滨州256600；3.山东大学医学系，山东济南250100）

紫草素诱导人肝癌肝细胞程序性死亡及其分子机制的研究

刘仁同1，魏春佩2，刘素侠3

（1.滨州医学院附属医院血液内科，山东滨州256600；2.滨州医学院附属医院检验科，山东滨州256600；3.山东大学医学系，山东济南250100）

目的探讨紫草素在体内、体外的抗肝癌活性及其可能机制。方法采用Annexin-V FITC/PI双染法检测3种肝癌细胞的细胞凋亡情况，LC3转换法(LC3 Conversion）检测细胞自噬数量，Western blot检测相关凋亡蛋白和自噬标志蛋白的表达，激光共聚焦观察线粒体自噬情况。结果紫草素对3种肝癌细胞均具有杀伤作用，且呈浓度依赖性和时间依赖性，Western blot检测细胞凋亡标志蛋白以及Annexin-V FITC/PI双染检测结果表明，较高浓度紫草素(6～8μM）处理24 h可有效诱导肝癌细胞凋亡。Caspase广谱抑制剂z-VAD预处理细胞可阻止紫草素诱导的肝癌细胞凋亡，紫草素诱导的细胞凋亡依赖于Caspase蛋白的剪切。另一方面，较低浓度紫草素(≤2.5μM）处理肝癌细胞12 h能诱导细胞自噬产生。LC3转换检测、GFP-LC3荧光点聚集和吖啶橙染色自噬泡证明了紫草素能促进细胞自噬的产生；细胞自噬早期抑制剂3-MA能有效阻断紫草素诱导的细胞自噬；LC3周转和p62降解则从动态上证明了自噬潮的产生，激光共聚焦结果紫草素诱导的细胞自噬有线粒体自噬的成分，说明紫草素对线粒体有损伤。结论紫草素能在体外能诱导肝癌细胞发生细胞凋亡和细胞自噬。……