云亚歌

(青海大学附属医院眼科，青海 西宁 810001)

眼睑基底细胞癌在老年人常见，病变发生时多种蛋白表达失调。连接子蛋白(CX)43是建立细胞间缝隙连接通讯的重要蛋白，其羧基端包含大部分与其他蛋白结合的位点，对黏附、细胞骨架和连环蛋白均有一定的调节作用〔1,2〕。近来人们也关注CX43在肿瘤中的表达，认为其作为抑癌基因起作用〔3,4〕。上皮型黏附素(E-cadherin)是黏附蛋白家族的重要成员，在正常基底细胞中高表达，对维持上皮细胞的形态和功能起重要作用〔5〕。

基质金属蛋白酶(MMP)-9是细胞外基质(ECM)降解的重要蛋白，其高表达时可以溶解ECM成分，尤其是基底膜，使肿瘤细胞易于脱离原发灶，形成转移瘤〔6,7〕。关于CX43、E-cadherin和MMP-9在老年基底细胞癌中的表达特征尚未见报道。本文关注老年眼睑基底细胞癌患者癌组织中CX43、E-cadherin和MMP-9的表达及相关性。

1 材料和方法

1.1临床资料 我院2009年8月至2013年6月眼睑基底细胞癌老年患者98例作为观察组，其中男60例，女38例，年龄60～83(平均69.1)岁。均符合世界卫生组织(WHO)中皮肤肿瘤病理学和遗传学的诊断标准，排除诊断不明确及伴有其他恶性肿瘤的患者。选择同期在我院诊断为基底细胞乳头状瘤的老年患者70例作为对照组，男40例，女30例，年龄60～82(平均68.7)岁。两组一般临床资料无明显差别，具有可比性。

1.2CX43、E-cadherin和MMP-9表达的检测 应用免疫组化SP法，DAB染色。严格按说明书进行操作，严格质量控制，减少人为误差。

1.3CX43、E-cadherin和MMP-9的判定方法 CX43和MMP-9以细胞质中出现黄染颗粒为阳性细胞，E-cadherin以细胞膜中出现完整的黄染颗粒为阳性细胞。每张切片中观察5个400倍高倍视野，阳性细胞≥25%为阳性，阳性细胞<25%为阴性。

1.4统计学方法 应用SPSS13.0软件进行χ2检验和线性相关分析。

2 结 果

2.1两组CX43、E-cadherin和MMP-9蛋白表达阳性率的比较 与对照组比较，观察组CX43和E-cadherin低表达，MMP-9高表达(P<0.000 1)，见表1。

2.2观察组不同临床特征患者CX43、E-cadherin和MMP-9蛋白表达阳性率的比较 观察组CX43、E-cadherin和MMP-9表达阳性率与肿瘤最大径、临床分期及Ki67表达密切相关。见表2。

2.3观察组CX43、E-cadherin和MMP-9表达相关性 CX43和E-cadherin表达呈正相关(r=0.49，P=0.020 9)，而CX43和MMP-9表达呈负相关(r=-0.45，P=0.032 6)。

表1 两组CX43、E-cadherin和MMP-9蛋白表达阳性率比较〔n(%)〕

表2 观察组不同临床特征患者CX43、E-cadherin和MMP-9蛋白表达阳性率的比较〔n(%)〕

3 讨 论

老年患者常伴退行性改变，使肿瘤蛋白的表达异常率更高。CX43是生物体组织中最广泛分布的CX，其作为跨膜蛋白，其氨基酸和羧基端定位于胞质，两个胞外环与相邻细胞的对应区域接触，一个胞内环则被认为参与通道通透性的调节，羧基端随着不同CX的长度而变化〔8,9〕。它们会经历转录、翻译后的修饰，被一些激酶所磷酸化。目前多数研究显示CX43起着肿瘤抑制因子的作用〔10,11〕。也有学者〔12〕研究CX43在肿瘤晚期可以观察到其瞬间上调，如乳腺癌细胞转移到骨组织时。E-cadherin是上皮细胞间连接的重要蛋白，在正常组织时高表达，对维持细胞形态和功能的完整性有重要作用。当其表达下降后，细胞间连接松散，易离开原发灶〔13〕。MMP-9也称明胶酶B，正常情况下低表达，可以使基底膜和ECM维持完整性，当肿瘤增殖活跃或呈进展状态时，MMP-9表达升高，此时ECM可以形成有效的降解，肿瘤细胞与外围屏障功能丢失，肿瘤易于播散形成转移〔14〕。

本实验结果提示CX43和E-cadherin低表达、MMP-9高表达促进基底细胞癌的发生过程。CX43可能通过通道依赖性和非通道依赖性发挥作用。在通道依赖性途径中，CX43的首要功能是建立缝隙连接通道，调节细胞之间胞质小分子的交换，此机制主要与CX43抑制肿瘤和肿瘤细胞缺乏正常细胞间交换的分子有关〔15,16〕。近来也有学者〔17〕关注CX43非通道依赖性的调控机制，即对细胞增殖凋亡的影响。CX43除了可通过增强细胞间缝隙连接通讯来抑制肿瘤细胞增殖外，还可通过延长细胞周期来抑制肿瘤细胞增殖〔18〕。研究认为CX43可以调节一些细胞周期相关基因的表达，如细胞周期相关蛋白A、D、P21、P27等〔19〕。本文结果提示CX43、E-cadherin和MMP-9 3种蛋白异常表达可以促进肿瘤的生长和细胞的增殖过程。CX43低表达促进肿瘤进展的过程中可能与细胞黏附和ECM降解作用有关〔20,21〕。CX43低表达后，可以引起细胞间连接的松动，使肿瘤细胞易脱离原发灶，此时由于MMP-9等ECM溶解作用，使肿瘤转移的通路被打开，肿瘤细胞突破基底膜或ECM，向周围浸润性生长和远处播散〔22～24〕。本实验也间接显示CX43对Ki67表达增殖作用的调节作用，即CX43高表达可以有效抑制肿瘤性的增殖过程，而CX43低表达可以使增殖活性提高，促进肿瘤的进展。

4 参考文献

1Moore K, Ghatnekar G, Gourdie RG,etal.Impact of the controlled release of a connexin 43 peptide on corneal wound closure in an STZ model of type 1 diabetes〔J〕.PLoS One, 2014;9(1): e86570.

2张 健, 续惠云, 乌佳伟, 等.骨组织细胞CX43形成的间隙连接及半通道研究进展〔J〕.中国细胞生物学学报, 2012;34(7): 721-5.

3郭瑞珍, 王 娟, 周开梅.皮肤病理性瘢痕上皮中CX43和C-myc的表达及意义〔J〕.中国皮肤性病学杂志, 2013;27(1): 19-21.

4陈毅德, 陈小旋, 沈丽娜, 等.肺癌组织中AKAP95和cyclinE2蛋白表达的临床意义及与CX43蛋白的关联性分析〔J〕.中华劳动卫生职业病杂志, 2012;30(10): 725-8.

5Zhao JQ, Sun FJ, Liu SS,etal.Expression of connexin 43 and E-cadherin protein and mRNA in non-small cell lung cancers in Chinese patients〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2013;14(2): 639-43.

6Zeng R, Duan L, Kong Y,etal.Clinicopathological and prognostic role of MMP-9 in esophageal squamous cell carcinoma: a meta-analysis〔J〕.Chin J Cancer Res, 2013;25(6): 637-45.

7Nanda DP, Sil H, Moulik S,etal.Matrix metalloproteinase-9 as a potential tumor marker in breast cancer〔J〕.J Environ Pathol Toxicol Oncol,2013;32(2): 115-29.

8吴志平, 赵晓昆, 吕 晨, 等.膀胱移行细胞癌中间隙连接蛋白CX43 mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达及其相关性研究〔J〕.中国全科医学, 2011;14(5C): 1674-6.

9孙文海, 刘华敏, 李玉军, 等.缝隙连接蛋白43和E-钙黏附素表达与喉癌生物学行为关系的研究〔J〕.中华耳鼻咽喉科杂志, 2004;39(5): 293-6.

10张立英, 周风华, 李文通, 等.连接蛋白43、Vimentin联合检测与乳腺癌转移关系的研究〔J〕.实用医学杂志, 2012;28(24):4099-101.

11张永兴, 徐洪涛, 齐凤杰, 等.连接蛋白43在肺癌组织中表达及对E-cadherin的影响〔J〕.中华病理学杂志, 2006;35(6): 339-41.

12Mclachlan E, Shao Q, Laird DW,etal.Connexins and gap junctions in mammary gland development and breast cancer progression〔J〕.J Membr Biol, 2007;218(1-3): 107-21.

13Weng W, Yin J, Zhang Y,etal.Metastasis-associated protein 1 promotes tumor invasion by downregulation of E-cadherin〔J〕.Int J Oncol, 2014;44(3): 812-8.

14Wang F, He W, Fanghui P,etal.NF-κBP65 promotes invasion and metastasis of oesophageal squamous cell cancer by regulating matrix metalloproteinase-9 and epithelial-to-mesenchymal transition〔J〕.Cell Biol Int, 2013;37(8): 780-8.

15林山力, 文 欢, 邓 红.连接子蛋白43在肿瘤中的作用及其机制的研究进展〔J〕.中华病理学杂志, 2014;43(1): 62-4.

16吴 瑾, 周红凤, 王翠华, 等.胃癌中连接蛋白32和43的表达及细胞间隙连接通讯功能的研究〔J〕.中华肿瘤杂志, 2007;29(10): 742-5.

17Kwon YS, Park TI, Cho Y,etal.Clinical usefulness of immunohistochemistry for plakoglobin, N-cadherin, and connexin-43 in the diagnosis of arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy〔J〕.Int J Clin Exp Pathol, 2013;6(12): 2928-35.

18Lindsey ML, Escobar GP, Mukherjee R,etal.Matrix metalloproteinase-7 affects connexin-43 levels, electrical conduction, and survival after myocardial infarction〔J〕.Circulation, 2006;113(25): 2919-28.

19Wu X, Huang W, Luo G,etal.Hypoxia induces connexin 43 dysregulation by modulating matrix metalloproteinases via MAPK signaling〔J〕.Mol Cell Biochem, 2013;384(1-2): 155-62.

20Wincewicz A, Urbaniak-Wsik S, Woltanowska M,etal.Comparison of primarily diet-modifiable intestinal factors, connexin 43 and E-cadherin with TP53 and TGFB1 in colorectal cancer〔J〕.Hepatogastroenterology, 2013;60(125): 1053-7.

21Yu SC, Xiao HL, Jiang XF,etal.Connexin 43 reverses malignant phenotypes of glioma stem cells by modulating E-cadherin〔J〕.Stem Cells, 2012;30(2): 108-20.

22Peng HJ, Dai DZ, Ji H,etal.The separate roles of endothelin receptors participate in remodeling of matrix metalloproteinase and connexin 43 of cardiac fibroblasts in maladaptive response to isoproterenol〔J〕.Eur J Pharmacol, 2010;634(1-3): 101-6.

23Tang XY, Liu Q, Dai DZ,etal.CPU0213, a novel endothelin receptor antagonist, suppresses the upregulation of matrix metalloproteinases and connexin 43 in hyperthyroid myocardium〔J〕.Pharmacol Rep, 2008;60(4): 524-31.

24Lee CC, Chen WS, Chen CC,etal.TCF12 protein functions as transcriptional repressor of E-cadherin, and its overexpression is correlated with metastasis of colorectal cancer〔J〕.J Biol Chem, 2012;287(4): 2798-809.