董海影 张 春 韩翠翠 杨 莹 马立威 牛英才 刘吉成

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 151100)

目前，免疫治疗成为了肿瘤治疗的新方向。研究表明〔1〕，姬松茸多糖(LMPAB)既可直接作用于肿瘤细胞或诱导肿瘤细胞凋亡，也可通过增强宿主免疫力而发挥抗肿瘤作用。本课题组长期从事LMPAB抗肿瘤的研究，发现其可通过增强宿主的免疫功能而发挥抗肿瘤作用，如促进树突细胞(DCs)成熟、激活巨噬细胞、活化T、B淋巴细胞、提高自然杀伤(NK)细胞、淋巴因子激活杀伤(LAK)细胞等细胞活性，证明其可能具有免疫佐剂的作用〔2〕。本研究主要探讨低分子量LMPAB对 DCs Th1型免疫反应的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1药物 LMPAB由齐齐哈尔医学院医药科学研究所分离提取，分子量约为48 000。卵白蛋白(OVA)和β-葡聚糖均由Sigma公司提供。

1.1.2动物 ICR雄性小鼠，6～8周龄，SPF 级，由吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供，许可证编号：SCXK (吉)2007-0003。

1.1.3试剂与仪器 白细胞介素-4(IL-4)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和肿瘤坏死因子(TNF)-α(RD公司)，WST(Millipore公司)，RPMI1640培养液与胎牛血清(Hyclone公司)。MR1812高速冷冻离心机为法国Jouan产品，MDF-492超低温冰箱为日本三洋公司产品，AE-240型电子天平为梅特勒-托利多仪器有限公司。

1.2方法

1.2.1DCs的获取 断髓处死小鼠，75%酒精浸泡10 min，解剖取出小鼠股骨和胫骨，75%酒精浸泡3～5 min，磷酸盐缓冲液(PBS)液冲洗骨髓至苍白，200目筛网两层过滤，离心去上清，加入红细胞裂解缓冲液2 min，加入10 ml RPMI1640培养液离心去上清，加RPMI1640制成单细胞悬液，加入GM-CSF、IL-4和完全培养液CM 5 ml，在37℃ 5%CO2的条件下培养6～8 d，期间隔天半量换液，同时加入IL-4、GM-CSF。

1.2.2WST检测细胞增殖 用……