赵 鑫，张 鑫，时红艳，陈建飞，迟延彬，韩 斆，李长龙，刘 宁，胡桂学*，冯 力*

(1.吉林农业大学动物科学学院，吉林长春 130118；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001）

抗猪传染性胃肠炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定

赵 鑫1，张 鑫2，时红艳2，陈建飞2，迟延彬2，韩 斆2，李长龙2，刘 宁1，胡桂学1*，冯 力2*

(1.吉林农业大学动物科学学院，吉林长春 130118；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001）

为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV）N蛋白的单克隆抗体(MAb）及鉴定其抗原表位，本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白，纯化后免疫BALB/c小鼠，将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过间接ELISA方法筛选阳性克隆，经4次细胞克隆纯化后，获得两株稳定分泌抗重组TGEV N蛋白的MAb，命名为3D7和5E8。通过western blot和间接免疫荧光试验对MAb的免疫活性和特异性进行鉴定，结果表明两株MAb均能够与TGEV全病毒反应并且特异性良好。利用合成的多肽对N蛋白抗原表位进行鉴定，初步确定MAb 3D7识别的表位为241AGKGDVTRFYGARSSSANFG260；5E8为184NKKDDSVEQAVLAALKKLGV203。本研究制备了两株MAb并对其表位进行鉴定，为TGEV检测方法的建立和N蛋白功能的分析奠定了基础。

猪传染性胃肠炎病毒；重组核蛋白；单克隆抗体；抗原表位

猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis，TGE）是由冠状病毒科TGE病毒(TGEV）引起的一种猪的高度接触性、致死性传染病，临床症状为呕吐、严重的腹泻和脱水性肠炎，不同年龄的猪均易感，尤其两周龄的猪致死率高达100%[1]。……