潘福星，王冬冬，曹志伟，冯培祥，刘 宏，齐 娟，孙忠晟，王祖荣，尹燕博*

(1.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109；2.青岛澳兰百特生物工程有限公司，山东青岛 266101；3.青岛博隆实验动物有限公司，山东青岛 266225）

比格犬IFN-α和IFN-βmRNASYB RGreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

潘福星1，王冬冬1，曹志伟1，冯培祥1，刘 宏1，齐 娟2，孙忠晟2，王祖荣3，尹燕博1*

(1.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109；2.青岛澳兰百特生物工程有限公司，山东青岛 266101；3.青岛博隆实验动物有限公司，山东青岛 266225）

为检测比格犬α和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β），本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列，分别设计合成特异性引物，以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH）mRNA为内参，建立SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增IFN-α、IFN-β和GAPDH的基因片段，并克隆于pMD19-T载体中制备标准品，建立荧光定量RT-PCR标准曲线。结果表明：IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102拷贝/μL～1×108拷贝/μL内均呈良好的线性关系，相关系数均大于0.994。组内组间变异系数均小于3%，特异性和重复性较好。同时采用常规RT-PCR方法与本研究建立的方法对30份临床样品检测，结果显示IFN-α和IFN-β的阳性符合率分别为96.43%和96.55%。本研究建立的检测方法为比格犬IFN mRNA的定量分析提供了有效手段。

SYBR Green I；实时荧光定量RT-PCR；比格犬；α-干扰素；β-干扰素

干扰素(Interferon，IFN）是一种多功能高活性的糖蛋白，具有广谱抗病毒和免疫调节功能[1]。其主要分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型IFN(IFN-α、β和ω）以抗病毒为主，Ⅱ型IFN(IFN-γ）则以免疫调节为主[2]。

比格犬已经被广泛应用于医学、生物学、病理学等科学领域，并且在以犬为实验动物的研究中，只有比格犬才被国际公认。……