程方明，张焕容,2*，洪 杰，王远微,2，岳 华,2，汤 承,2

(1.西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041；2.西南民族大学动物医学四川省高等学校重点实验室，四川成都 610041）

基因C型鸭甲肝病毒单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

程方明1，张焕容1,2*，洪 杰1，王远微1,2，岳 华1,2，汤 承1,2

(1.西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041；2.西南民族大学动物医学四川省高等学校重点实验室，四川成都 610041）

为制备基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C）单克隆抗体(MAb），本研究根据DHAV-C ORF编码氨基酸序列与基因A型DHAV(DHAV-A）相应序列比对结果，利用生物信息学软件筛选位于DHAV-C ORF编码蛋白序列上的不同抗原表位，合成5条十肽表位序列，分别与KLH载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠，经细胞融合筛选获得5株稳定分泌抗DHAV-C MAb杂交瘤细胞株。Western blot显示，5株MAb均能够与DHAV-C发生特异性反应，其中5H24-9、3E18-4和5E3-9 3株MAb不与DHAV-A、鸭瘟病毒、新城疫病毒和禽流感病毒反应，为DHAV-C的特异性MAb，同时也证明与这3株MAb结合的十肽序列为DHAV-C的抗原表位。这3株MAb亚类分别为IgG2b、IgG1和IgG2b。MAb的制备为建立DHAV-C的检测方法和致病机理奠定了基础。

基因C型鸭甲肝病毒；抗原表位；单克隆抗体；ELISA

鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH）是由3种血清型的鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus，DHV）引起雏鸭的一种以肝脏病变为主的急性、高度致死性和接触性传染病[1-2]。自发现以来，在全世界养鸭地区广泛分布，是危害养鸭业最为严重的传染病之一[3]。3种血清型DHV之间互不发生交叉反应，临床上最常见的为血清Ⅰ型DHV(DHV type 1，DHV-1），DHV-1又称鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus，DHAV）。DHV-1为小RNA病毒。根据基因组成差异，DHAV分为3种基因型，王丽艳等称之为基因A型、B型和C型，分别对应传统血清Ⅰ型DHAV、“台湾新型”和“韩国新型”DHAV[4-7]。……