黄锦宏 杨吉成 凌春华 赵大国 谢宇锋 由振华

生长抑制因子4 （inhibitor of growth 4, ING4）基因属生长抑制因子（ING）家族成员，最初在人脑垂体中被分离出来[1]。该基因定位于染色体12p13-31区域内，由8个外显子和7个内含子组成，cDNA全长1,380 bp，编码蛋白含249个氨基酸分子[2]。生物信息学分析显示ING4有一个PHD（plant homeodomain）锌指区和核定位信号（NLS）区。ING4基因在多种肿瘤中易发生缺失突变和/或表达下调，并与肿瘤发生和肿瘤恶性程度密切相关[3,4]。外源性ING4基因可通过多种途径发挥抗肿瘤效应，对多种肿瘤细胞具有抑癌作用，其抑癌作用与抑制肿瘤细胞生长和肿瘤血管的生成，诱导肿瘤细胞凋亡，调节肿瘤细胞生长周期、引起G2/M期阻滞，增强p53活性等有关[5-8]；为研究ING4在肺癌基因治疗中的应用，本研究建立SPC-A1细胞肺腺癌裸鼠移植瘤模型，通过腺病毒介导的ING4（Ad-ING4）基因治疗，观察ING4对移植瘤的生长抑制作用，并对其可能的分子机制进行了研究，为肺癌的基因治疗提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 人肺腺癌细胞株SPC-A1细胞、携带绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒（adenovirus Ad-GFP）和腺病毒介导的ING4（Ad-ING4）均由苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室提供；培养基RPMI-1640，胎牛血清购自Gibcol Brl公司；TUNEL细胞凋亡检测试剂盒购自北京碧云天生物技术研究所；天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、环氧化酶-2（COX-2）、Fas、FasL一抗、二抗均购自福州迈新生物技术公司（进口分装）。

1.1.2 实验动物 3周-4周龄，体重约20 g，雄性BALB/cnu/nu裸鼠15只，购自中科院上海斯莱克实验动物中心［许可证号：SCXK(沪)2007-0005］，饲养于苏州大学实验动物中心SPF级动物室，自由摄入经过严格灭菌处理的饲料及水，实验操作遵守无菌原则。……