于 飞，张 浪，梁 青，傅 晟，张 骏，吕昕泽，方珍文

(1. 天津市临床药物关键技术重点实验室，天津医科大学药学院，天津 300070；2. 天津国际生物医药联合研究院，天津 300457；3. 南开大学药学院，天津 300071；4. 广西食品药品检验所，广西 530021)

大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis，AIA)模型是研究类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)及抗RA药效评价常用的一种动物模型[1]。目前，关于AIA模型的研究主要集中于探讨关节病理过程与疾病机制，对于关节外的血常规等生理指标的研究较少。本文对AIA大鼠的血常规指标进行分析探讨，旨在为RA的研究提供参考。现报告如下。

1 材料和方法

1.1 实验材料

完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant, CFA)，购于sigma公司。SPF级Wistar大鼠，雄性40只，体重200±20 g，购于军事医学科学院实验动物中心，SCXK(军)2007-004。

1.2 佐剂性关节炎模型建立

Wistar大鼠随机分成对照组和模型组，各20只。模型组大鼠右后足趾皮内注射0.1 mL CFA，对照组大鼠同部位注射等量生理盐水。注射后每隔4 d评价关节炎严重程度，评分标准[2]如下：0分，正常；1分，踝关节有红斑及轻微肿胀；2分，踝关节至跖关节或掌关节有红斑及轻微肿胀；3分，踝关节至掌关节或跖趾关节有红斑及中度肿胀；4分，踝关节至趾关节有红斑及重度肿胀。每只足趾单独评分，将四肢评分相加作为关节炎评分。建模后第28天处死大鼠，取趾关节行病理切片观察。

1.3 血常规分析

注射CFA 28 d后，眼静脉取血，EDTA-K2抗凝用于血常规分析。血常规分析采用全自动血球分析仪(sysmex XT2000i，Japan)。

1.4 统计方法

±SD表示，组间比较采用t检验，P < 0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 佐剂性关节炎模型

模型组Wistar大鼠注射CFA后足爪明显肿胀，出现体重下降、关节变形、皮肤红肿甚至溃烂等症状(彩插6图1A、B)。AIA大鼠关节炎评分明显高于正常组的评分，差异极显著(P< 0.01)(表1)。病理切片观察发现，与正常鼠相比，AIA大鼠关节结构严重受损，软骨面破坏、局部纤维化，滑膜组织增生，关节腔内有大量炎性细胞浸润(彩插6图1C、1D)。

2.2 血常规分析

AIA大鼠和正常大鼠的血常规测量结果见表1。27个检测指标中，与正常大鼠相比，AIA大鼠有14个指标有显著性差异(P< 0.01)，分别为白细胞分类计数的WBC、NEUT(%)、LYMPH%、MONO和网织红细胞的RET、HFP、MFP、LFP、IFP以及红细胞的MCV、MCH、RDW-SD、RDW-CV。

表1 AIA大鼠与正常大鼠血常规指标测定结果(n=10)

3 讨论

AIA大鼠模型广泛应用于RA研究，对于抗RA药物的发现有重要的作用。然而，对于该模型的血常规研究较少，缺乏相关基础数据。

本研究成功建立了AIA大鼠模型，外观可见关节变形、皮肤红肿甚至溃烂等症状，并通过病理切片观察到AIA大鼠关节结构严重受损。血常规分析发现，AIA大鼠的白细胞出现明显变化。与正常大鼠比较，AIA大鼠WBC、NEUT、LYMPH和MONO均明显上升，差异极其显著性(P< 0.01)，此结果与史智勇等[3]研究结果相似。血液中的单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞等白细胞在趋化因子的作用下游出血管，不断向炎症部位聚集，释放氧自由基、细胞因子等物质，参与RA的发展[4]。本研究结果进一步说明，与人类相似，白细胞参与并介导AIA大鼠关节炎的形成与发展。在疾病活动期，类风湿性关节炎患者血小板计数会明显升高，甚至达到正常值的1～2倍[5]。与人的类风湿性关节炎不同，本组AIA大鼠血小板无明显变化，这可能与AIA模型的发病机制和进程不同有关。

MCV、MCH的显著降低，提示AIA大鼠出现慢性病性贫血(anemia of chronic disease, ACD)，这与人的类风湿性关节炎相似。贫血是RA常见的一种关节外表现，30%左右的类风湿性关节炎患者会出现ACD[6]，其病理机制较为复杂，主要与细胞因子有关。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α, TNF-α)，白介素-1(interleukin-1, IL-1)，白介素-6 (IL-6)，干扰素-γ(interferon-γ, INF-γ)等细胞因子和NO等炎症介质可以抑制骨髓红系造血，促进骨髓红系前体细胞凋亡，减少促红细胞生成素的分泌，促使铁代谢异常[7]。研究表明，AIA大鼠血清及炎症部位的TNF-α、IL-1、IL-6、INF-γ和NO等与RA相关的细胞因子及炎症介质均有不同程度的升高[8]，提示AIA大鼠贫血机制可能与人类相同。网织红细胞出现明显升高，说明AIA大鼠的骨髓造血功能增强，进一步提示AIA大鼠有类似人类风湿性关节炎的ACD症状。

综上所述，AIA大鼠白细胞明显上升，会出现类似于人类风湿性关节炎的慢性病性贫血。AIA大鼠可以用于模拟人的类风湿性关节炎伴贫血病。

参考文献：

[1] 刘元刚，刘树滔，饶平凡. 类风湿性关节炎啮齿动物模型的研究进展[J]. 中国实验动物学报，2007,15(6)：470-473.

[2] 魏伟，吴希美，李元建. 药理实验方法学[M]. 北京：人民卫生出版社，2010：749-757.

[3] 史智勇，朱发仁，王风琴，等. 实验性关节炎大鼠的血液常规测定值[J]. 上海实验动物科学，1999，19(3)：169-171.

[4] Szekanecz Z, Koch AE, Kunkel SL,etal. Cytokines in rheumatoid arthritis: potential targets for pharmacological intervention[J]. Drugs Aging, 1998,12:377-390.

[5] 白洲霞. 类风湿性关节炎实验室检测指标的分析探讨[J]. 甘肃中医学院学报，2006，23(3)：50-52.

[6] 李振玲. 类风湿性关节炎贫血机制研究进展[J]. 中日友好医院学报，2005，19(3)：175-178.

[7] 王亮，卓光生. 类风湿性关节炎血液学改变机制的研究进展[J]. 医学综述，2006，12(4)：205-206.

[8] 田俊阁，卢伟伟，平立峰. 中药对佐剂性关节炎大鼠细胞因子影响的研究进展[J]. 现代中西医结合杂志，2009，18(30)：3774-3776.