MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定

2014-08-13朱顺飞李永菊赵娟娟郭萌萌陶弋婧秦娜琳

遵义医科大学学报 2014年6期

朱顺飞，李永菊，陈超，胡燕，赵娟娟，郭萌萌，陶弋婧，秦娜琳，徐林

(遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地，贵州遵义 563099)

微小RNA-7(microRNA-7，miR-7)是新近研究报道的miRNA家族成员之一，定位于第15号染色体，已有大量文献报道其在细胞和组织器官发育以及多种肿瘤的发生和生长中发挥着重要调控作用[1-3]。如Liu等[4]研究发现，miR-7可靶向作用于RAF1蛋白，抑制血管内皮细胞的增殖；Meza-Sosa等[5]研究发现，miR-7通过抑制肿瘤蛋白KLF4的表达，进而促进上皮细胞的转化；Pollock等[6]研究发现，miR-7可通过调控P53信号途径抑制大脑皮层的发育。由于miR-7在不同细胞以及组织器官中的靶分子不同，因此其调控机体细胞发育和组织器官功能的确切机制仍待大量研究阐明。我们课题组在前期实验中利用miRNA sponge(海绵体)技术原理，成功构建了miR-7的真核表达载体pEGFP-C2-miR-7-sponge，其可以有效下调人肺癌细胞中miR-7成熟体的表达[7]，并利用此载体构建了miR-7基因敲减小鼠模型。本研究中，我们常规剪取了miR-7基因敲减小鼠的脚趾和尾巴，分别提取其基因组DNA和总RNA，利用PCR技术扩增目的基因—增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)片段；利用Real-time探针法检测两组小鼠7个不同组织器官中miR-7成熟体的相对表达水平，以鉴定miR-7基因敲减小鼠模型；并初步观察模型小鼠中心脏、肺脏等组织器官的形态学结构改变，以期为后续深入研究miR-7分子在不同细胞以及组织器官发育中的生物学功能提供前期的实验基础。