李五一 ，徐 萌，刘建国，罗国炜

(1.遵义医学院附属第五医院 口腔科，广东 珠海 519125；2.遵义医学院珠海校区 口腔系，广东 珠海 519041；3.遵义医学院 口腔学院，贵州 遵义 563099；4贵州省高等学校 口腔疾病研究特色重点实验室，贵州 遵义 563099；5.香港中文大学 病理解剖及细胞学系，威尔斯亲王医院，华南国家肿瘤重点实验室，香港 999077)

病毒载体(Viral vectors)是一种常使用于分子生物学的工具，利用病毒具有传送其基因组进入其他细胞，进行感染的原理,将遗传物质带入细胞, 主要应用于基础研究、基因疗法或疫苗。目前基因工程常用的病毒可分为逆转录病毒、慢病毒与腺病毒。与传统的脂质体转染相比较，慢病毒载体最大的优点就是可以感染分裂细胞和非分裂细胞,可转染难转染细胞，解决转染效率低的问题。正常的鼻咽上皮细胞，转染效率低且不稳定，后续实验效果差。本研究拟采用第3代慢病毒载体系统感染鼻咽上皮细胞构建稳定表达癌基因肽脯氨酰异构酶PIN1的鼻咽上皮细胞株，免疫荧光、RT-PCR、westernblot检测目的基因PIN1的表达，为下一步进行相关的功能学实验奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 正常鼻咽上皮细胞株NP69、293TN细胞，由香港中文大学鼻咽癌研究室保存。角质形成细胞无血清培养基(Keratinocyto serm-free medium，KSFM)、牛脑垂体提取液(BPE)、重组表皮生长因子(rEGF)购自invitrogen。RPIM-1640培养液购自Sigma，10% 胎牛血清购自Gibico。Lipofectamine2000 脂质转染试剂，购自life technologies公司。Lenti Starter kit第3代慢病毒包装系统，购自system biosciences。RNA抽提试剂TRIZOL，购自invitrogen，RT-qPCR试剂盒，Westernblot 相关试剂购自life technologies。BCA蛋白含量测定试剂盒，购自Pierce。PIN1引物和Actin引物由life technologies公司合成。……