单国燕等

摘 要 以热研2号柱花草花药为外植体，研究不同植物生长调节剂 、培养基以及低温预处理等对柱花草花药培养的影响，以期建立柱花草花药培养体系，获得再生植株，为柱花草倍性、基因组学及分子生物学研究提供材料。关键词 柱花草 ；花药培养 ；愈伤组织诱导 ；不定芽分化

分类号 S541.04

In Vitro Anther Culture of Stylosanthes

SHAN Guoyan1，2） ZHENG Jinlong1，2） GAO Jianming1，2，3）

CHEN Helong1，2，3） ZHANG Shiqing1，2，3） YI Kexian1，2）

（1 Environment and Plant Protection Institute，CATASs，Haikou，Hainan 571101，P.R. China；

2 Ministry of Agriculture Key Laboratory of Tropical Crop Biotechnology， Haikou， Hainan 571101；

3 Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology，CATAS，Haikou，Hainan 571101，P.R. China）

Abstract In order to establish an efficient anther culture system of Stylosanthes， get regenerate plantlet and provide basic materials for the research of ploidy， genomics and molecular biology of Stylosanthes. This experiment taking the anther of Stylosanthes guianensis cv， Reyan2 as explants to study the effect of plant growth regulator， medium and low temperature pretreatment on Stylosanthes anther culture. The results indicated that low temperature pretreatment for 24 h was better than other treatments. N6 medium supplemented with 2，4-D 0.5 mg/L，KT 1.0 mg/L was the best for induction of cullus. MS +NAA 0.2 mg/L + 6-BA 3.0 mg/L was the best for regeneration culture.

Keywords Stylosanthes ； anther culture ； callus induction ； division of adventitious bud

柱花草（Stylosanthes spp.）又名笔花豆，是全球热带地区栽培面积最大、应用最广泛的优良豆科牧草。柱花草原产于南美洲，该属有44个以上的种或亚种[1]。柱花草炭疽病是威胁其推广种植的主要障碍，近年来国内外在柱花草种质资源的收集、引种选育，从体细胞变异或体细胞融合技术中获得抗炭疽病植株以及利用遗传工程获得抗病转基因植株等方面展开了多项研究[2-6]。国外在20世纪60年代就开展了柱花草的组织培养研究[7-8]，但由于所使用的基因型有限，成效不显著。随着遗传工程技术的日益成熟，通过该技术培育更多优良的柱花草品种希望较大。同科柱花草不同品种的组织培养技术国内外已有成功的报道[9-13]。但是目前关于柱花草花药培养研究尚未见报道。

花药培养作为一种新的育种手段，在很多作物育种中得到应用。通过花药培养可诱导花粉发育形成单倍体，快速获得纯系，缩短育种周期，还有利于诱导花药形成隐型突变体，提高选择效率。所诱导出的单倍体仅有一套染色体，它具有特殊的遗传学特征：（1）遗传的（染色体的）稳定性和变异性；（2）小孢子无性系变异；……