屈巧凤，姜大成

(长春中医药大学，长春 130117)

林蛙皮含有胶原蛋白、透明质酸、多肽、金属元素等多种化学成分[1-4]。胶原蛋白是哺乳动物体内含量最多的蛋白质，占体内蛋白质总量的25%～30%，相当于体质量的6%[5-6]。胶原蛋白因其独特的结构和功能，被广泛的应用于食品、化妆品、医学、造纸等领域[7-11]。本文从药材粉碎度、加水量、酶的种类3个方面探讨从林蛙皮中提取胶原蛋白的影响因素及优化条件。

1 实验材料

取中国林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)腹部的皮，干燥，将其粉碎，过60目筛，备用。微型植物试样粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂)、TU-1810型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)、ZK-82B型真空干燥箱(上海市实验仪器总厂)、HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)、柠檬酸(天津市福晨化学试剂厂)、柠檬酸钠(天津市福晨化学试剂厂)、对二甲氨基苯甲醛(天津市光复精细化工研究所)、冰醋酸(北京化工厂)、L-羟脯氨酸(L-Hydroxyproline，批号111578-200201，中国药品生物制品检定所)。

2 实验方法

2.1 林蛙皮中胶原蛋白的提取方法 将上述粉碎好的林蛙皮粉末称量5 g，加入适量的蒸馏水，以浸没为准，再分别加入适量的胰蛋白酶和柠檬酸，在30 ℃下提取48 h,过滤，收集滤液，将滤液离心，3 000 r/min，离心15 min，收集上清液，冷冻干燥。即得胶原蛋白粗提物[12]。

2.2 胶原蛋白的含量测定方法 称量2 g胶原蛋白粗提物，加入50 mL 6 mol/L的盐酸，120 ℃消解8 h，放冷，挥去盐酸，过滤，蒸馏水定容至100 mL，取1.5 mL，以1 mol/L的NaOH调整PH到6.0，定容至25 mL，吸取1 mL，加入1 mL蒸馏水、1 mL柠檬酸缓冲溶液和1 mL氯胺T，25 ℃保温氧化10 min，然后加入3.5 mol/L高氯酸溶液1 mL，室温放置10 min，加入对二甲氨基苯甲醛试剂1 mL，震荡均匀(其低温易结晶，使用前应加热)，在65 ℃水浴中保温10 min，使其显色，于558 nm下测其吸光度[13-14]。……