傅淑平， 杨 丽， 洪 浩， 偶 晨， 张荣华△

(1南京中医药大学针药结合省部共建教育部重点实验室，江苏 南京 210023;2暨南大学药学院中药教研室, 广东 广州 510632)

梓醇(catalpol)是从玄参科植物地黄中分离出来的单一有效化学成份之一，也是中国药典指定的地黄定性指标，属于环烯醚萜类化合物[1]。我们的前期研究显示，0.05～10 mg/L梓醇培养液对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的增殖均有促进作用，其中1.0 mg/L梓醇培养液对细胞的增殖作用最强，但其具体作用机制并不明确[2]。近期研究表明，Wnt信号通路在BMSCs自我更新过程中具有重要的调节作用[3], 但其是否与梓醇的促干细胞增殖作用有关，尚不清楚。本研究主要在前期工作基础上，检测梓醇对BMSCs细胞周期的影响，同时观察Wnt信号通路中相关因子在此过程中的变化情况，探讨梓醇促BMSCs增殖的作用机制。

材 料 和 方 法

1 动物

清洁级(SPF)3月龄SD雌性大鼠(体重约200 g)，由南京医科大学实验动物中心提供(合格证号为0004482)。

2 药物

梓醇标准品购买于北京世纪奥科生物技术有限公司，结构式见图1，纯度经HPLC检测均大于98%，称取梓醇1 mg，溶解于10 mL低糖DMEM完全培养液中，0.22μm过滤分装，配制成为100 mg/L母液，-20 ℃保存备用。

Figure 1. The chemical structure of catalpol.

3 主要试剂

低糖DMEM培养基和胎牛血清(Gibco)，胰酶(Amresco)，EDTA和RNase A (Sigma)，碘化丙啶和Trizol (Invitrogen)，RT-PCR Kit(TaKaRa)，β-catenin抗体(Cell Signaling Technology)，ECL化学发光试剂盒(Pierce)。

4 方法

4.1梓醇对BMSCs细胞周期的影响 取生长良好的第3代BMSCs以5×107cells/L密度接种在培养瓶中，将细胞分为空白对照组与梓醇处理组，待细胞贴壁后，吸出培养液，换成无血清培养基，24 h细胞周期同步化后，各组分别加入DMEM培养液及1.0 mg / L梓醇培养液培养细胞，6 d后，待细胞汇合至90%左右，消化细胞，PBS洗2次，1 200 r/min离心4 min，制成单细胞悬液，移入离心管。……