王启林， 李瑞乾， 金从国， 赵 斌， 张国颖， 白 宇， 雷永虹△

(1昆明医科大学第三附属医院泌尿外科， 2云南省肿瘤研究所，云南 昆明 650118)

前列腺癌在演变过程中可以发生雄激素依赖性向非依赖性的转变，DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传机制在其中起着重要作用[1]。研究发现组蛋白H3的甲基化和乙酰化与前列腺癌的发展具有明显的相关性[2]。由于组蛋白甲基化是多位点(赖氨酸/K和精氨酸/R)、多形式(一甲基化、二甲基化和三甲基化)的，以往关于前列腺癌中组蛋白H3的甲基化主要是针对某些既定位点进行分析，是否还存在未知的修饰位点和修饰模式以及它们在雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌中是否有所不同，这些问题都缺乏全面了解。因此，我们采取可以整体研究蛋白质修饰谱的蛋白质组学策略对此进行分析。通过重甲基细胞培养条件下氨基酸稳定同位素标记技术(stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC)[3]结合生物质谱分析雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP和非依赖性前列腺癌细胞DU145组蛋白H3的甲基化修饰谱，寻找差异修饰位点和模式，探讨前列腺癌从激素依赖性发展为非激素依赖性的表观遗传机制。

材 料 和 方 法

1 主要试剂和仪器

雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP和非依赖性前列腺癌细胞DU145(中国科学院上海细胞库)；有、无甲硫氨酸的RPMI-1640培养基、透析胎牛血清和细胞培养用胰酶(Invitrogen)；胎牛血清(Biochrom AG)；L-methionine-(methyl-13C, D3) ([13CD3]-甲硫氨酸)、DTT和iodoacetamide(Sigma)；蛋白质组用胰酶(Promega)；蛋白酶抑制剂(Roche)；TransZol Up(中国全式金生物公司)；反转录和荧光定量检测试剂(TaKaRa)；……