白银花，李晓，刘婧，张立实

（四川大学华西公共卫生学院，四川成都610041）

芦荟银杏复合制剂为芦荟凝胶冻干粉与银杏叶提取物复合制剂。芦荟（Aloe）是百合科多年生常绿肉质草本植物，富含多糖、有机酸、蛋白质、多肽、氨基酸以及多种矿物质等营养物质和多酚类还原性物质，被誉为“21世纪最佳保健食品”和纯天然抗氧化剂，在食品、化工、医药等领域应用十分广泛[1]。银杏Ginkgo biloba L.又称白果树、公孙树，属银杏科银杏属裸子植物，主产中国[2]。其叶、果和外种皮等皆具有药用价值，被称为“全身都是宝的活化石”[3]。国内外的一些研究表明，银杏叶所含的黄酮化合物具有明显抗氧化活性和抗自由基活性[4-6]。现拟用大剂量乙醇造小鼠氧化损伤模型，研究芦荟银杏复合制剂的抗氧化作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

芦荟银杏复合制剂：XX生物科技有限公司；清洁级雄性昆明种小鼠（50只，体质量25 g～30 g，8周龄）：成都达硕生物科技有限公司，动物合格证号SCXK（川）2008-24。

50%乙醇（分析纯）：宝信生物科技有限公司；GSH试剂盒、T-SOD试剂盒、GSH-Px试剂盒、MDA试剂盒、蛋白质羰基含量试剂盒：南京建成生物工程研究所；其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器与设备

UV-2800型紫外-可见分光光度计：尤尼柯（上海）仪器有限公司；BIO-RAD680酶标仪：上海普林斯顿生物科技发展有限公司；AU400生化分析仪：奥林巴斯中国有限公司；DY89-IDI电动玻璃匀浆器：宁波新芝科技有限公司；Thermo ST16低温高速离心机Thermo Scientific；Xiang Yi-L530高速台式离心机：长沙湘仪离心机仪器公司；HHSYZL-Ni电热恒温水浴箱北京长风仪器公司。

1.3 方法

1.3.1 动物分组

实验小鼠饲养温度为18℃～22℃，湿度为55%～75%，自然光照，自由采食和饮水。实验前将50只小鼠在实验环境下给予基础饲料适应性饲养7 d，按体质量随机分成5组，分别为正常对照组、模型对照组、芦荟银杏复合制剂配方二低、中、高剂量组。

1.3.2 造模及给药方法

低、中、高 3个剂量组分别按 500、1 000、2 000 mg/（kg·bw·d）的剂量灌胃给予不同浓度受试样品，溶剂对照组和模型对照组给予同体积双蒸水，连续灌胃30d，末次灌胃后，模型对照组和3个剂量组禁食16 h（过夜），然后1次性灌胃给予50%乙醇12mL/（kg·bw），正常对照组不作处理。

1.3.3 测试样品的制备和检测

模型对照组和实验剂量组灌胃乙醇6 h后，股动脉取血致死，1.5mLEP管收集血液，3000r/min离心10min，取上清液备用。解剖小鼠，取肝脏，称取0.4 g～0.5 g和0.1 g～0.2 g肝脏组织，分别加入9倍体积的生理盐水（用于测肝脏GSH、T-SOD、GSH-Px和MDA含量）和蛋白质羰基含量测试盒试剂一（用于测肝脏蛋白质羰基含量），于匀浆器中制成10%的组织匀浆液，2 500 r/min离心10 min，取上清液备用。

采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒检测血清和肝组织抗氧化物质GSH含量、抗氧化酶TSOD和GSH-Px活力、脂质氧化产物MDA含量以及蛋白质羰基含量；采用全自动生化分析仪测定肝组织蛋白含量。

1.4 数据处理

2 结果与分析

2.1 芦荟银杏复合制剂对小鼠一般情况的影响

芦荟银杏复合制剂对小鼠一般情况的影响见表1。

表1 芦荟银杏复合制剂对小鼠体重的影响（±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

表1 芦荟银杏复合制剂对小鼠体重的影响（±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

组别 剂量/（g/kg·bw）动物数/只 0 d体重/g 15 d体重/g 30 d体重/g正常对照 0.00 10 27.70±1.42 39.00±3.16 45.50±2.55模型对照 0.00 10 28.30±1.83 42.30±3.30 46.10±2.96低剂量 0.19 10 28.60±1.37 42.00±2.63 47.00±2.54中剂量 0.38 10 28.70±2.54 39.50±2.91 46.90±1.73高剂量 0.76 10 28.70±1.61 40.60±3.31 47.00±1.83

表1表明，实验结束时，模型对照组和各受试配方组与正常对照组比较体重均略有增加但无统计学意义（P＞0.05）。各组动物在实验过程中活动正常，无异常表现，表明各配方对小鼠生长发育和一般健康情况无不良影响。

2.2 芦荟银杏复合制剂对小鼠血清抗氧化能力的影响

芦荟银杏复合制剂对小鼠血清抗氧化能力的影响，见表2。

表2 芦荟银杏复合制剂对小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影响（±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（±S，N=10）

表2 芦荟银杏复合制剂对小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影响（±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（±S，N=10）

△：*表示与正常对照组比较P＜0.05；**表示与正常对照组比较P＜0.01；○表示与模型对照组比较P＜0.05；○○表示与模型对照组比较P＜0.01。

组别GSH/（mg/L）SOD/（U/mL）GSH-Px/（U/mL）MDA/（nmol/mL）正常对照 12.781±2.385 167.855±25.678 951.429±174.876 11.000±6.416模型对照 6.829±1.490** 95.056±25.277** 782.143±153.031* 39.500±10.659**低剂量 10.839±2.211○○ 143.836±43.387○○ 746.786±178.003 20.000±7.071○○中剂量 14.034±4.393○○ 150.791±35.146○○ 768.214±169.261 17.500±10.607○○高剂量 19.485±3.076○○ 154.501±27.365○○ 981.429±131.533○○ 8.500±4.116○○

表2表明，给予大剂量乙醇造模，模型对照组与溶剂对照组比较，小鼠血清GSH、SOD水平下降（P＜0.01），GSH-Px水平降低（P＜0.05），MDA 水平升高（P＜0.01）。说明乙醇氧化损伤模型造模成功。

给予不同剂量的芦荟银杏复合制剂30天后，经大剂量乙醇造模，各实验组与模型对照组比较，小鼠血清GSH、SOD水平随芦荟银杏复合制剂浓度增加升高（P＜0.01）；高剂量组 GSH-Px水平升高（P＜0.05）；MDA水平随芦荟银杏复合制剂浓度增加降低（P＜0.01）。说明芦荟银杏复合制剂能够使乙醇氧化损伤模型小鼠血清抗氧化物质GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂质氧化产物MDA含量降低。

2.3 芦荟银杏复合制剂对小鼠肝组织抗氧化能力的影响

芦荟银杏复合制剂对小鼠肝组织抗氧化能力的影响，见表3。

表3 芦荟银杏复合制剂对小鼠肝组织GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白质羰基的影响（±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the effects of protein carbonyl（±S，N=10）

表3 芦荟银杏复合制剂对小鼠肝组织GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白质羰基的影响（±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the effects of protein carbonyl（±S，N=10）

△：*表示与正常对照组比较P＜0.05；**表示与正常对照组比较P＜0.01；○表示与模型对照组比较P＜0.05；○○表示与模型对照组比较P＜0.01。

组别GSH/（mg/gprot）SOD/（U/mgprot）GSH-Px/（U/mgprot）溶剂对照 6.808±1.467 195.843±21.325 365.721±65.858模型对照 5.497±0.809* 166.743±9.030** 311.444±47.389*低剂量 10.275±1.260○○ 180.218±13.822 353.854±38.931中剂量 15.274±1.752○○ 228.315±20.561○○ 541.652±72.063○○高剂量 19.378±1.733○○ 218.276±14.876○○ 471.245±49.828○○MDA/（nmol/mgprot）0.950±0.325 2.462±0.278**0.751±0.348○○0.738±0.114○○0.543±0.263○○蛋白质羰基/（nmol/mgpro）3.554±0.965 6.352±1.031**4.550±0.913○○2.552±0.918○○2.220±0.607○○

表3表明，给予大剂量乙醇造模，模型对照组与溶剂对照组比较，小鼠肝组织GSH和GSH-Px水平下降（P＜0.05），SOD 水平下降（P＜0.01），MDA 和蛋白质羰基水平升高（P＜0.01）。说明乙醇氧化损伤模型造模成功。

给予不同剂量的芦荟银杏复合制剂30天后，经大剂量乙醇造模，各实验组与模型对照组比较，小鼠肝组织GSH水平随芦荟银杏复合制剂浓度增加升高（P＜0.01）；芦荟银杏复合制剂中、高剂量组SOD和GSH-Px水平升高（P＜0.01）；MDA和蛋白质羰基水平随芦荟银杏复合制剂浓度增加降低（P＜0.01）。说明随芦荟银杏复合制剂能够使乙醇氧化损伤模型小鼠肝组织抗氧化物质GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂质氧化产物MDA含量降低，蛋白质氧化产物蛋白质羰基含量降低。

3 结论

乙醇大量摄入，可激活氧分子产生自由基，导致组织细胞过氧化效应及体内还原性谷胱甘肽的耗竭[7]。灌胃大剂量乙醇是目前最新的衰老造模法。灌胃大剂量乙醇后，SOD活性下降，MDA含量升高[8-9]。本实验中，给予50%乙醇12 mL/（kg·bw）造模，模型对照组与溶剂对照组比较，小鼠血清和肝组织GSH、SOD、GSHPx水平均降低，MDA和蛋白质羰基水平均升高。说明乙醇氧化损伤模型造模成功。

机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系[10-11]。GSH的主要生理作用是清除体内的自由基，做为体内一种重要的抗氧化剂，保护蛋白质和酶等分子中的巯基。GSH-Px和SOD是机体内两种重要的抗氧化酶。GSH-Px能催化过氧化氢的分解，SOD能够清除超氧阴离子自由基，这两种酶活力的变化能反映机体氧化损伤的程度；MDA和蛋白质羰基分别是脂质和蛋白质过氧化的产物，它们的变化可以反映细胞损伤的程度[12-13]。大量研究表明，当机体遭受自由基攻击而被氧化时，抗氧化剂的注入和使用，使抗氧化物质GSH含量增加，血清和肝组织中抗氧化酶类SOD和GSH-Px活性等酶活性提高，MDA和蛋白质羰基含量下降，从而使机体的抗氧化能力增强[14-15]。

本实验中，给予不同剂量的芦荟银杏复合制剂30天后，经大剂量乙醇造模，实验剂量组与模型对照组比较，小鼠血清和肝组织GSH、SOD、GSH-Px水平升高，MDA和蛋白质羰基水平降低。说明芦荟银杏复合制剂能够使乙醇氧化损伤模型小鼠血清和肝组织抗氧化物质GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂质氧化产物MDA含量降低，蛋白质氧化产物蛋白质羰基含量降低。

由于芦荟凝胶中的多糖、酚类化合物和银杏叶中的黄酮类化合物可以捕捉和清除 O2-·、·OH、H2O2、烷类自由基和脂类自由基等，通过对这些自由基起一种氢原子供体的作用而终止自由基连锁反应链，从而阻止和抑制氧自由基反应和脂质、蛋白质过氧化反应，抑制LPO及其代谢产物丙二醛、共轭二烯等活性毒副物质的生成，抑制蛋白质羰基生成[4-6]。同时，酚类、黄酮类化合物还可参与调节和提高SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性[16-17]，从而发挥抗氧化功效。

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