韩镌竹，苏崴艺，李欣南

(辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，沈阳110016)

0 引 言

随着社会经济的高速发展人民生活水平日益提高，牛奶已经成为人们餐桌上必不可少的食物之一，随之产生的经济效益也越来越高。一些不法商贩为谋取暴利，在牛奶中违法添加有毒有害物质，掺假造假现象严重，牛奶的质量安全问题已经成为国内外研究的热点与重点[1-4]。由于大豆价格低廉，蛋白含量高，通用蛋白测定方法难以从牛奶中区分开[5]，在牛奶中掺入大豆已成为掺假的主要手段之一。目前牛奶中掺杂植物蛋白的研究很少，有研究羊奶中掺杂的牛奶[6]；荧光PCR方法实时检测牛奶中掺杂大豆成分[7]的实验等，但是复式PCR还是一个比较崭新的领域。复式PCR具有敏感、特异、快速等特点，检测大批样本效率较传统方法高数倍，成本低，可以更加准确的检测出牛奶中掺杂的大豆源性物质。

1 仪器与材料

1.1 仪器

CF16RX高速低温冷冻离心机，TC-512PCR仪，DYY-6C型电泳仪，170-8170型紫外凝胶成像系统，AL 104-IC电子天平。

1.2 试剂与材料

基因组DNA提取试剂盒，TritonX-100、异硫氰酸胍(分析纯)，牛奶、豆浆粉(市售)；试验所用引物均为南京金斯瑞生物科技有限公司合成，序列如表1所示。

表1 引物序列

2 方 法

2.1 不同体积分数豆浆的牛奶的配制(是按照质量分数配置的豆浆牛奶)

准确称取3.0 g豆浆粉溶于30 mL温开水中，制成豆浆溶液，分别配制体积分数为3%，4%，5%，10%豆浆的牛奶。

2.2 牛奶和大豆的基因组DNA提取方法

2.2.1 热解法提取基因组DNA

分别取2.1制备样品10 mL于50 mL离心管中，4℃，4 000 r/mim离心10 mim，用棉签擦去管壁上的乳蛋白和乳脂，重复离心擦拭步骤3次。……