基于不同半抗原的呋喃唑酮代谢物免疫检测方法的建立与比较
2014-06-21石贤爱裴世锋李向楠朱秋享叶小军樊海平
石贤爱,裴世锋,李向楠,朱秋享,叶小军,樊海平
(1.福州大学生物科学与工程学院,福建 福州 350108;2.福建省医疗器械和医药技术重点实验室,福建 福州 350002;3.福建省淡水水产研究所,福建 福州 350002)
硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素,其中呋喃唑酮主要用于治疗肠道感染和球虫病[1-2]。呋喃唑酮在体内迅速代谢,主要代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)可与细胞膜蛋白质结合成形成稳定化合物而长期存在于体内[3-4]。AOZ具有很强的“三致”作用,被视为呋喃唑酮残留标示物[5-6]。我国于2007年将硝基呋喃类药物列为违禁药物。
目前用于检测AOZ的方法主要有酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)[7]、液相色谱-紫外法[8]、液相色谱-质谱法[9-10]和液相色谱-串联质谱法[11-12]等。其中,ELISA法具有成本低、灵敏度高、特异性好、操作简便、适合高通量样品筛选等优点,成为现场快速检测的首选[13-15]。
AOZ结构中无芳香族化合物基团,且分子质量小,在体内较难激活产生抗体,从而限制了基于半抗原AOZ的单克隆抗体免疫检测试剂盒的开发[16]。目前研究者多采用先将AOZ与带苯环的化学物质反应生成衍生物后,再与蛋白质进行偶联以制备人工抗原等,再获得抗体用于检测。如AOZ与2-硝基苯甲醛反应生成3-(2-硝基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮[17-18]、与4-羧基苯甲醛反应生成3-(4-羧基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮(3-{[(4-carboxyphenyl)methylene]-amino}-2-oxazolidinone,CPAOZ)[19-21]、与2,4-二硝基氟苯反应生成3-(2,4-二硝基苯胺基)-2-恶唑烷酮[22]、或与顺丁烯二酸酐反应生成相应的衍生物[23]等,这就需要先将被测样品粉碎、除水、衍生化后,经过提取、净化等步骤后再进行分析,过程繁琐,检测时间长,检测精度受到限制。……
