徐义刚，李丹丹，崔丽春，刘忠梅，李苏龙

（1.黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，黑龙江 哈尔滨 150001；2.海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心，海南 海口 570125；3.东北林业大学研究生院，黑龙江 哈尔滨 150040）

肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）是大肠杆菌的一个亚型，主要致病菌株血清型为O157∶H7，呈全球性分布，可产生志贺氏毒素样细胞毒素[1-2]。畜禽为本病储存宿主和主要传染源，如牛、羊、猪等，以牛带菌率最高。EHEC O157∶H7传播途径复杂多样，主要通过进食被污染的食物、水或与病人接触而传染，出现腹泻、出血性结肠炎、溶血性贫血和溶血性尿毒综合征等临床症状[3-6]。常见被污染的食物有牛肉、牛奶及其制品、禽肉、羊肉、蔬菜和水果等，快餐类食品极易造成暴发性食物中毒。EHEC O157∶H7引起的危害受到广泛关注，建立快速、准确的检测方法对防控该致病菌具有重要意义。

传统的检测方法（分离培养结合生化与血清学鉴定）检测时间长、敏感性差、严重影响检测效率[7-8]。为满足EHEC O157∶H7快速检测要求，研发出了免疫磁珠富集法[9]、生物传感器法[10-12]、蛋白芯片[13]、基因芯片[14]、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）[15-20]、实时荧光PCR[21-23]和LAMP[24]等检测方法。其中，PCR方法因检测快速、灵敏度高，成为主要采用的检测方法。引物设计是建立有效PCR方法的关键因素，常规的PCR引物设计，不仅需要反复优化引物的各项参数与反应条件，尤其是退火温度，而且需要反复比对引物的特异性，以防止非特异性扩增，尤其是涉及多重PCR方法设计时，需要大量的实验以验证方法的特异性，费时又费力。……