刘玉清 邸阜生 贾国瑜 王 璐 李 强 张 洁 邵金双

糖尿病脂肪肝患者血浆CHGA与ATGL水平相关性研究*

刘玉清1邸阜生2△贾国瑜2王 璐2李 强2张 洁2邵金双1

目的 探讨2型糖尿病（T2DM）合并非酒精性脂肪肝（NAFLD）患者血浆嗜铬蛋白A（CHGA）与脂肪组织三酰甘油脂肪酶（ATGL）的相关性。方法采用酶联免疫吸附法检测T2DM合并NAFLD组（A组，74例）、T2DM不合并NAFLD组（B组，76例）和正常对照组（NC组，75例）血浆CHGA和ATGL水平，分析各代谢指标与CHGA、ATGL的相关性，回归分析T2DM合并NAFLD的影响因素。结果血浆CHGA（μg/L）水平在A组（83.15±9.46）、B组（70.90± 2.75）均高于NC组（46.74±8.15），A组高于B组（均P＜0.01）。血浆ATGL（μg/L）水平在A组（21.36±13.42）、B组（40.29±22.83）均低于NC组（72.30±26.41），A组低于B组（均P＜0.01）。在A组患者中，血浆CHGA与ATGL、碳水化合物氧化率呈负相关，与空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、游离脂肪酸（FFA）、脂肪氧化率呈正相关；血浆ATGL水平与体质指数（BMI）、FINS、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、HOMA-IR呈负相关，与FFA呈正相关。多元逐步线性回归分析显示：FINS、ATGL、FFA是影响CHGA水平的因素。Logistic回归分析显示：CHGA、ATGL、FFA水平是T2DM合并NAFLD的影响因素。结论血浆CHGA和ATGL与糖脂、能量代谢密切相关，且两者可能通过相互作用影响T2DM合并NAFLD的发生发展。

糖尿病，2型；脂肪肝；脂肪酸类，非酯化；嗜铬蛋白A；三酰甘油脂肪酶

嗜铬蛋白A（chromogranin A,CHGA）是神经肽类家族中的一员，广泛分布于神经内分泌细胞的嗜铬颗粒内。作为激素前体，它可被分泌泡或血液中的多种蛋白酶分解，形成组织特异性片段，其中的胰抑素、儿茶酚抑素可参与调节肝脏及脂肪组织的糖脂代谢[1-2]。脂肪组织三酰甘油脂肪酶（adipose triglyceride lipase,ATGL）是启动三酰甘油（TG）分解的重要脂肪酶之一，其在脂肪组织和肝脏中均有表达，与游离脂肪酸（FFA）浓度、葡萄糖耐受性及胰岛素敏感性密切相关[3]。非酒精性脂肪肝（NAFLD）作为伴有糖脂代谢紊乱的相关疾病，与2型糖尿病（T2DM）具有共同的启动因子——胰岛素抵抗，本文通过研究T2DM合并NAFLD患者血浆CHGA与ATGL水平的相关性，以及两者与糖脂、能量代谢变化的相关性，探讨两者对T2DM合并NAFLD发生发展的影响。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2011年7月—2013年2月我院初诊断的T2DM患者150例，其中合并NAFLD患者（A组）74例，未合并NAFLD患者（B组）76例。同时选取健康体检者75例（NC组），均为口服葡萄糖耐量试验（OGTT）正常且无脂肪肝者。糖尿病诊断均符合1999年WHO糖尿病诊断标准；NAFLD的诊断参照非酒精性脂肪性肝病诊疗指南。排除标准：（1）1型糖尿病、妊娠糖尿病及其他特殊类型糖尿病。（2）严重感染或糖尿病急性并发症。（3）慢性心衰及严重肺脑肝肾功能不全者。（4）患者神经内分泌肿瘤或其他恶性肿瘤史。（5）有饮酒史且饮酒折合乙醇量男性每周＞140 g，女性每周＞70 g。（6）病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性肝病及药物、毒物引起的肝病等。

1.2 研究方法 测量受试者身高、体质量、腰围、臀围，计算体质指数（BMI）和腰臀比（WHR）。抽取受试者清晨空腹静脉血进行相关检测，采用酶联免疫吸附法（试剂购自北京康肽生物科技有限公司）测定血浆CHGA、ATGL和FFA水平，葡萄糖氧化酶法测定空腹血浆葡萄糖（FBG）和餐后2 h血糖（2 hPG），高压液相色谱法测定糖化血红蛋白（HbA1c），酶化学法测定总胆固醇（TC）、TG、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。口服75 g无水葡萄糖做OGTT及胰岛素释放试验，用放射免疫法测定空腹胰岛素（FINS），并采用稳态模式评估法（homeostasis model assessment，HOMA）计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。B超检查由同一位经验丰富的医师在同一台机器（飞利浦公司HD-11型B超检测仪）上进行。24 h尿素氮、呼吸商（RQ）、静息代谢率（REE）、碳水化合物氧化率、脂肪氧化率及蛋白质氧化率采用美国森迪斯公司生产的Vax29测试系统测定。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0软件分析数据，计量资料以±s表示；组间比较采用方差分析及q检验，计数资料间比较采用χ2检验。单因素分析采用Pearson相关，多因素分析采用多元逐步回归。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床资料的比较 3组间性别、年龄、身高比较差异无统计学意义（P＞0.05）。A组、B组的体质量、BMI、腰围、WHR、HbA1c、FBG、2 hPG、FINS、HOMAIR、TG、TC、LDL-C、FFA高于NC组，HDL-C低于NC组（P＜0.05或P＜0.01）。A组的FINS、HOMA-IR、FFA高于B组（P＜0.01），2组其他临床指标比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1、2。

Table 1 Comparison of baseline characteristics between different groups表1 各组一般情况比较

2.2 血浆CHGA和ATGL水平比较 血浆CHGA水平在A组、B组均高于NC组，A组高于B组（P＜0.01）。血浆ATGL水平A组、B组均低于NC组，A组低于B组（P＜0.01），见表3。

2.3 能量代谢指标比较 A、B组的24 h尿素氮、REE、REE/体质量和脂肪氧化率显著高于NC组，RQ值和碳水化合物氧化率显著低于NC组（P＜0.01）。A、B组间差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表3。

2.4 相关性分析 在A组人群中，血浆CHGA与FINS、HOMA-IR、FFA、脂肪氧化率呈正相关（r分别为0.387、0.352、0.428、0.221，P＜0.05），与碳水化合物氧化率、ATGL呈负相关（r分别为-0.362、-0.541，P＜0.05）。血浆ATGL水平与BMI、FINS、TC、TG、HOMA-IR呈负相关（r分别为-0.223、-0.463、-0.272、-0.403、-0.194，P＜0.05），与FFA呈正相关（r=0.482，P＜0.01）。

2.5 多元逐步回归分析 在A组人群中，以CHGA水平为因变量，以FINS、HOMA-IR、FFA、脂肪氧化率、ATGL、碳水化合物氧化率为自变量进行分析，结果显示FINS、FFA、ATGL进入分析模型=38.779+ 2.645XFINS+1.026XFFA-0.893XATGL，见表4。

Table 2 Comparison of clinical parameters between different groups表2 各组临床参数水平的比较

Table 3 Comparison of serum levels of CHGA, ATGL and energy metabolism parameters between different groups表3 各组血浆CHGA、ATGL水平及能量代谢指标比较

Table 4 Results of multiple stepwise regression analysis of influence factors of CHGA表4 CHGA影响因素的多元逐步回归分析结果

2.6 Logistic回归分析 以T2DM是否合并NAFLD为因变量（A组=1，B组=0），以表1、2中有意义的变量为自变量，进行Logistic回归分析（向后逐步筛选变量，纳入水准为0.05，剔除水准为0.1），结果显示CHGA、FFA、ATGL水平是T2DM合并NAFLD的影响因素，见表5。

Table 5 Multivariate Logistic regression analysis in patients with diabetes表5 糖尿病患者中多因素Logistic回归分析

3 讨论

NAFLD与T2DM均为与胰岛素抵抗相关的代谢性疾病，因胰岛素的信号传导通路受到抑制，可表现为高胰岛素血症，伴有脂肪组织脂质分解加强，非脂肪组织（肝、骨骼肌、心脏）的异位脂肪沉积，进一步抑制了胰岛素在糖脂代谢的作用，造成全身糖脂及能量代谢的紊乱。本研究结果显示，T2DM合并或不合并NAFLD患者的血糖、血脂及HOMA-IR显著高于正常人，与NAFLD和T2DM的代谢特点相符。T2DM合并NAFLD组的FFA高于单纯T2DM组，这与NAFLD的肝脏脂肪沉积60%来源于脂肪组织分解的过多FFA有关。同时T2DM患者的REE/体质量和脂肪氧化率高于正常人，RQ值和碳水化合物氧化率低于正常人，提示此类患者饮食中脂肪比例增多，且T2DM患者由于胰岛素相对不足，机体能量供给中糖代谢通路受阻，以脂代谢供能为主。

CHGA属嗜铬蛋白家族，存在于所有神经内分泌细胞内能分泌儿茶酚胺的囊泡中，最初于肾上腺嗜铬粒细胞的分泌颗粒中发现。在应激状态下，CHGA与儿茶酚胺一同释放，可出现循环中CHGA水平的升高。本研究表明T2DM患者血浆CHGA水平高于正常人，可能与T2DM和NAFLD患者机体存在应激状态有关。T2DM患者血浆CHGA水平与FINS、2 h PG、FFA呈正相关，与碳水化合物氧化率呈负相关，且多元逐步回归显示FINS、FFA为其独立影响因素，表明CHGA分泌可能与胰岛素水平相关，发挥与胰岛素相反的促进脂肪分解、抑制糖利用的作用。有研究证实，CHGA分解的功能肽段CST和PST具有促进脂肪组织脂质分解的作用，且PST亦可抑制胰岛素的分泌及其信号通路[1-2]，因此，在T2DM合并NAFLD患者中，由于胰岛素水平的升高，可能引起PST升高抑制胰岛素作用，增加循环中的FFA水平，造成脂质沉积于肝脏，加重胰岛素抵抗，促进疾病的发生发展。

Kralisch等[4]研究发现胰岛素可通过p44/42丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）途径抑制3T3-L1脂肪细胞ATGL水平，同时有研究证实来源于CHGA的肽段PST可激活基础和胰岛素刺激的p44/42MAPK途径[5]。因此，CHGA可能是通过功能肽段PST激活p44/42MAPK途径使ATGL水平降低。这与在T2DM合并NAFLD患者中，CHGA与ATGL呈负相关相符，同时说明CHGA通过ATGL以外的途径引起FFA增加。另外，ATGL可表达于肝脏，并通过增强三酰甘油水解活性减轻脂肪肝[6]。本研究表明，T2DM合并NAFLD患者ATGL水平低于单纯T2DM和正常人，因此，ATGL水平的下降可致肝脏三酰甘油沉积增多，促进脂肪肝形成。同时，Logistic回归分析结果显示，CHGA、ATGL、FFA水平是T2DM合并NAFLD的影响因素，说明CHGA和ATGL与T2DM合并NAFLD的疾病发生发展密切相关。

[1]Gayen JR,Saberi M,Schenk S,et al.Anovel pathway of insulin sensitivity in chromogranin A null mice:a crucial role for pancreastatin in glucose homeostasis[J].J Biol Chem,2009,284(42):28498-28509.

[2]Bandyopadhyay GK,Vu CU,Gentile S,et al.Catestatin(chromogranin A352-372)and novel effects on mobilization of fat from adipose tissue through regulation of adrenergic and leptin signaling[J].J Biol Chem,2012,287(27):23141-23151.

[3]Ong KT,Mashek MT,Bu SY,et al.Hepatic ATGL knockdown uncouples glucose intolerance from liver TAG accumulation[J]. FASEB J,2013,27(1):313-321.

[4]Kralisch S,Klein J,Lossner U,et al.Isoproterenol,TNFalpha,and insulin downregulate adipose triglyceride lipase in 3T3-L1 adipocytes[J].Mol Cell Endocrinol，2005,240(1-2):43-49.

[5]González-Yanes C,Sánchez-Margalet V.Pancreastatin modulates insulin signaling in rat adipocytes:mechanisms of cross-talk[J].Diabetes,2000,49(8):1288-1294.

[6]洪燕青，王璐，贾国瑜，等.ATGL与2型糖尿病非酒精性脂肪肝相关性的初步研究[J].天津医药，2010,38(9)：768-770.

（2013-06-05收稿 2013-09-11修回）

（本文编辑 闫娟）

The Correlation Analysis of CHGA and ATGL in Patients of Type 2 Diabetes Mellitus with Nonalcoholic Fatty Liver Disease

LIU Yuqing1,DI Fusheng2,JIA Guoyu2,WANG Lu2,LI Qiang2,ZHANG Jie2,SHAO Jinshuang1
1 The Third Central Clinical Medical College of Tianjin Medical University,Tianjin 300170,China；2 Department of Endocrinology,Tianjin Third Central Hospital,Tianjin Key Laboratory of Artificial Cell

ObjectiveTo investigate the relationship between plasma levels of chromogranin A(CHGA)and adipose triglyceride lipase(ATGL)in patients with type 2 diabetes(T2DM)combined non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).MethodsThe plasma levels of CHGA and ATGL were assayed by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) in T2DM patients with NAFLD(group A,n=74),T2DM without NAFLD(group B,n=76),and normal group(group NC,n= 75).The correlation between CHGA,ATGL and other metabolic index was analyzed.ResultsThe plasma level of CHGA was significantly higher in group A(83.15±9.46)and group B(70.90±2.75)than that of group NC(46.74±8.15,P＜0.01), and the level of CHGA was significantly higher in group A than that of group B(P＜0.01).The plasma level of ATGL was significantly lower in group A(21.36±13.42)and group B(40.29±22.83)than that of group NC(72.30±26.41,P＜0.01),and the level was lower in group A than that of group B(P＜0.01).There was a negative correlation between the plasma CHGA,ATGL and carbohydrate oxidation rate in group A.There was a positive correlation between fasting insulin(FINS),insulin resistance index(HOMA-IR),free fatty acid(FFA)and fat oxidation rate in group A.There was a negative correlation between plasma level ATGL and body mass index(BMI),FINS,cholesterol(TC),triglyceride(TG)and HOMA-IR,meanwhile,it was positively correlated with FFA.The multiple stepwise regression analysis showed that FINS,ATGL and FFA were independent variables for CHGA.The Logistic regression analysis showed that plasma levels of CHGA,ATGL and FFA were the independent predictors of T2DM with NAFLD.ConclusionThe plasma levels of CHGA and ATGL are closely correlated with substance and energy metabolism,and the interaction between them may play an important role in the pathogenesis of T2DM with NAFLD.

diabetes mellitus,type 2；fatty liver；fatty acids,nonesterified；CHGA；ATGL

R575.5，R587.1

A【DOI】10.3969/j.issn.0253-9896.2014.01.005

*天津市卫生局科技基金资助项目（项目编号：2010KR02）

1天津医科大学三中心临床学院（邮编300170）；2天津市第三中心医院内分泌科、天津市人工细胞重点实验室

△通讯作者 E-mail:difusheng@vip.163.com