崔 梅，陈方哲，陈淑芬，陆征宇，董 强

组织激肽释放酶（tissu kallikrein，TK）是激肽释放酶－激肽系统（kallikrein－kinin system，KKS）的重要组成部分，主要通过其底物的酶解产物激肽，间接激活缓激肽B1 受体（B1R）和B2 受体（B2R）而参与体内许多生理和病理过程［1］。近年大量研究已经证实TK 或TK 基因对缺血再灌注损伤具有明确的保护作用，但对其机制却不甚了解。

神经元线粒体运动调节蛋白（Mitochondrial movement protein）的主要功能是调节线粒体在神经元中的移动，保证线粒体的正确分布以应对病理损伤［2］。在脑缺血过程中，线粒体的正常分布和运动对神经元功能的实现具有重要意义。激肽释放酶能否影响线粒体运动调节蛋白未见报道。因此，本研究旨在观察激肽释放酶对糖氧剥夺神经元线粒体运动调节蛋白的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 新生SD 大鼠由上海斯莱克公司提供；D－Hanks液、DMEM 高糖培养液、Neurobasal A 培养液、B27supp lement、谷氨酰胺、胎牛血清、青霉素和链霉素等购自Gibco 公司；神经元特异性烯醇化酶（NSE），Miro1、Miro2、Milton 抗体购自Calbiochem 公司；抗大鼠微管相关蛋白（MAP2）多克隆抗体购自Abcam 公司；活细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit－8，CCK－8）购于日本同仁公司；蛋白浓度测定试剂盒（BCA法）购于上海申能博彩生物试剂公司；组织激肽释放酶由广州天普公司提供。

1.2 皮层神经元原代培养 按文献报道［3］进行原代皮层神经元培养，主要步骤如下：断头取出生24h内SD 大鼠的脑组织，在预冷的D－Hanks液中用血管镊仔细去除脑膜和血管，分离出大脑皮层并经0.125%EDTA2胰蛋白酶37 ℃酶解10min，用吸口圆润的玻璃吸管吹打至细胞分散，细胞悬液于4℃1 000r／min 离心5min，弃上清，沉淀用神经元种植液（含90%DMEM高糖培养基和10%胎牛血清）重悬。……