许国洋，包小玉，范 磊，刘明刚，张冬梅，周 尧，熊 涛，潘康成*

(1.四川农业大学，四川 雅安 625000；2.重庆市荣昌县畜牧局，重庆 402460)

防御素是机体内一类富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽，广泛分布于动物、植物、昆虫等体内[1-2]，是机体先天免疫系统的重要组成部分，具有广谱抗菌性，作为机体本身的一种活性物质，病原菌不易对其产生耐药性[3-4]。因其具有高效的抗菌活性和免疫增强作用，并且不会引起病原菌的耐药性等优势而成为目前生物医学方面的一个研究热点[5]。

1994年，Harrwing等最先从鸡的嗜中性粒细胞中分离提取到了β-防御素，并将其分别命名为Gal-1，Gal-1α，Gal-2[6]。目前，在 NCBI中已登录的鸡防御素共有14种，均为β-防御素[7-8]，杨玉荣等用乙酸提取的方法从鸡的肠道中分离到了Gal-13，并证明了它的抑菌活性和对雏鸡免疫功能的影响[9-10]，但提取工艺繁琐耗时，并且提取量有限。而在大肠杆菌中表达Gal-13的情况还未见报道[11]。本研究构建Gal-13成熟肽序列重组表达载体，并在大肠杆菌中大量表达，制备具有一定生物活性的重组蛋白，为进一步研究其生物特性奠定基础，也为其在畜牧业中的生产应用提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 主要实验材料 大肠杆菌DH5α、BL21(DE3)、金黄色葡萄球菌和表达载体pGEX-4T-1均由重庆市畜牧科学院兽医所提供；pMD18-T载体和限制性内切酶均购自TaKaRa公司；T4 DNA连接酶和TRIzol试剂盒均购自Gibco公司；Prime Script RT-PCR Kit购自北京康为世纪生物科技有限公司；Gel DNA Recovery Kit购自PUEX公司；Mini Plasmid Kit购自天根生化科技(北京)有限公司；GST小鼠单克隆抗体(GST2)、碱性磷酸酶标记的山羊抗小鼠IgG(完整分子)抗体、显色剂BCIP/NBT均购自Sigma公司；……