同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

2014-05-21施开创官家明李凤梅莫胜兰陈汉忠

中国预防兽医学报 2014年6期

关键词：检测

施开创，官家明，胡杰，李凤梅，莫胜兰，陈汉忠*，李军

(1.广西动物疫病预防控制中心，广西南宁 530001；2.广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530005)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起猪的一种高度接触性传染病。PRRS最早于1987年在美国发生，现已呈世界性分布，给养猪业造成严重的经济损失。根据病毒基因组的差异，PRRSV可以分为欧洲型和美洲型病毒株，两种基因型病毒株之间基因组差异很大，核苷酸序列同源性仅约为60%[1]。我国于1996年首次分离到PRRSV美洲型经典株[2]，2006年暴发高致病性PRRS后分离到以Nsp2蛋白481 aa和533 aa～561 aa发生30个氨基酸不连续缺失为遗传标志的美洲型高致病性变异株(HP-PRRSV)[3]。2010年农业部批准在我国开始临床使用HP-PRRSV弱毒活疫苗，包括JXA1-R株、HuN4-F112株、TJM-F92株等。其中，TJM-F92株除了在Nsp2蛋白存在481 aa和533 aa～561 aa共30个氨基酸的不连续缺失以外，还出现628 aa～747 aa(1882 nt～2441 nt)共120个氨基酸(360个核苷酸)的整段缺失[4]。2010年以来，广西在政府采购中一直采购TJM-F92株活疫苗用于强制免疫。虽然广西尚未发现欧洲型病毒株，但由于美洲型经典株、变异株同时存在和流行[5]，加上临床使用的TJM-F92弱毒疫苗株，亟需建立一种PRRSV野毒株和疫苗株的鉴别检测方法。本研究针对PRRSV美洲型野毒株及TJM-F92疫苗株的基因组序列，建立了能够同时检测并区分美洲型经典株、变异株以及TJM-F92株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法，为临床快速鉴别检测及流行病学调查提供了有效的技术手段，在国内尚属首次报道。