万春和，程龙飞，邵周伍林，刘思国，黄 瑜*，张 云*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建 福州 350013)

鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer，RA)是一种革兰氏阴性、无鞭毛、无芽孢，可以形成荚膜的棒状杆菌。RA病又称鸭传染性浆膜炎，以纤维性心包炎、肝周炎和气囊炎为典型“三炎”病变特征，该病于1932年首次报道于美国，我国于1982年首次报道[1-2]。RA目前已报道的血清型多达21种，并且陆续有新血清型的报道，不同血清型之间无显著的交叉保护[3-4]。

在铁限制的环境下，绝大多数致病菌通过产生特殊的螯合剂-铁载体来获取铁离子。最新研究表明，致病菌铁离子摄取系统起调控作用的基因主要分为两大类：大肠杆菌中的铁离子摄取抑制子(FUR)[5-6]和白喉棒状杆菌中的白喉棒状杆菌毒素抑制子(DtxR)[7-8]。本研究建立基于TaqMan探针检测RA的荧光定量PCR方法，该方法操作简便、特异性强、敏感性高，重复性好，可以实时定量分析RA铁依赖抑制子基因(RaDtxR)在动物体内的含量来检测其RA感染程度，为研究RA的治病机理奠定基础。

1 材料和方法

1.1 菌株、病毒株及主要试剂 RA血清型(1型、2型、3型及10型)、大肠杆菌(E.coli)、巴氏杆菌(P.multocida)、沙门氏菌(Salmonella)、Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)、禽坦布苏病毒(ATMUV)和鸭圆环病毒(DuCV)均由哈尔滨兽医研究所分离、鉴定和保存；Premix ExTaqTM(Probe qPCR)、Premix ExTaqTMVersion 2.0(Loading dye mix)、pMD18-T、50 bp DNA Ladder均购自TaKaRa公司；胶回收试剂盒、质粒小量抽提试剂盒、细菌基因组提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司；……