孙 涛，周世良，邓明俊，郑小龙，王 群，雷质文，曹丙蕾，凌宗帅，梁成珠*

(1.山东出入境检验检疫局，山东 青岛 266002；2.潍坊市畜牧兽医局，山东 潍坊 261041；3.济南出入境检验检疫局，山东 济南 250014)

新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)为动物产品国际贸易中重点检查的对象。根据病毒株致病力的差异可以分为强毒力型、中毒力型及弱毒力型。目前，我国国家标准[1]及行业标准[2]对NDV中强毒株的检测均基于融合蛋白F基因进行RT-PCR检测。但由于缺少标准的检验用质控物质，导致针对NDV检测的同一类试剂质量存在差异。

世界卫生组织曾在1996年和1997年相继研制了丙型肝炎病毒(HCV)[3]和人细小病毒[4]的核酸标准物质，开创了临床定量检测的标准化。及时借鉴开展NDV及相关制品的标准物质研究，对确保防控制品质量均一、安全有效具有重大意义。

本研究选取针对NDV中强毒株具有鉴别意义的F基因，通过体外转录制备其全长cRNA，并检测其均一性、稳定性和定值等指标，为NDV核酸检测标准品的制备奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 病毒株、菌株及载体 NDV中强毒株核酸标准样品所用标准病毒株F48E9购自中国兽医药品监察所；NDV野毒ND28从山东某鸡场发病鸡分离；NDV疫苗毒LaSota、NDVⅠ系苗、Ⅱ系苗、Ⅳ系苗购自青岛易邦生物技术有限公司；JM109大肠杆菌感受态细胞购自TaKaRa公司；pGEM-T Easy Vector SystemⅡ载体购自Promega公司。

1.2 主要试剂 Rneasy Mini Kit购自QIAGEN公司；NDV中强毒株荧光RT-PCR诊断试剂盒购自深圳市匹基生物工程股份有限公司；AMV反转录酶、TaqDNA聚合酶及限制性内切酶购自TaKaRa公司；Wizard Plus DNA Purification System质粒提取试剂盒、体外转录试剂盒(RiboMAXTMLarge Scale RNA Production System-T7)购自Promega公司。……