李超斯，周国辉，孙 静，刘 云，于 力*

(1.东北农业大学动物医学院，黑龙江 哈尔滨 150030；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队，黑龙江 哈尔滨 150001)

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的一种烈性传染病[1]。大多数国家一直都通过注射灭活疫苗来控制该病的流行。灭活疫苗在纯化的过程中除去了大部分非结构蛋白，免疫动物几乎不产生非结构蛋白抗体。自然感染动物体内有病毒复制，产生非结构蛋白抗体，因此通过检测FMDV非结构蛋白抗体有无可以区别免疫接种动物与自然感染动物[2]。

FMDV主要有9个非结构蛋白(L蛋白、2A、2B、2C、3A、3B1、3B2、3B3、3D)[3]，其中一些非结构蛋白具有免疫原性。Bergmann等比较了3A、3B、3D和3ABC等抗原用于间接ELISA检测感染牛的敏感性和准确性，结果表明3B抗原的效果最好[4-5]。

对于FMDV感染的检测，ELISA方法与其他免疫学检测技术相比具有灵敏、特异、廉价、快速、稳定而且易于实现自动化操作等优点，其中以单克隆抗体(MAb)为基础的ELISA反应模式采用了MAb的高度均质性和高度特异性，可以用于检测FMDV感染。本研究以MAb包被酶标板结合原核表达的3B重组蛋白，减少了直接包被抗原所产生的非特异性反应，而且可以更好地展示抗原的空间结构，有利于抗原与抗体的特异性结合[6-7]。

1 材料和方法

1.1 病毒株、细胞、抗原及实验动物 O型及Asia 1型FMDV、A型FMDV感染性cDNA克隆、牛肠道病毒(BEV)、SP2/0骨髓瘤细胞、BHK-21及抗FMDV、猪瘟病毒(HCV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)阳性血清均由本实验室保存；……