蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
2014-05-21赵国辉孙恩成秦永丽徐青元刘二战钱爱东吴东来
席 娜,赵国辉,孙恩成,秦永丽,孙 亮,魏 天,徐青元,杨 涛,孙 晶,刘二战,钱爱东,吴东来*
(1.吉林农业大学动物科学技术学院,吉林 长春 130000;2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江 哈尔滨 150001)
蓝舌病(Bluetongue,BT)是一种由呼肠孤病毒科环状病毒属的BT病毒(BTV)引起的,通过库蠓等昆虫传播的非接触性反刍动物传染病,主要感染反刍类动物,动物感染BTV的平均死亡率为30%,绵羊高达80%[1]。OIE将其列为须通报疾病,我国规定为一类动物疫病。BT流行广泛,目前尚无有效治疗方法[2],由于BT血清型众多,新的血清型不断出现,目前已发现26个血清型[3-4],各血清型之间交叉保护免疫性差,因此预防该病的关键是建立快速的血清型检测方法。2006年以来,BTV8在德国、法国、荷兰、比利时等欧洲国家暴发,造成了严重的经济损失。目前还未有BTV8在我国流行的相关报道,因此,必须加强我国BTV尤其是BTV8相关工作的研究。
BTV基因组由10个线性双股正链RNA节段组成,外壳由L2和M5基因编码的VP2和VP5组成,占病毒总量的40%,其中VP2是主要型特异性抗原,大多数能够诱导产生中和抗体的抗原表位都存在于VP2蛋白上,并且具有与受体结合以及凝集红细胞作用[5]。本实验利用真核表达的重组BTV8 VP2蛋白制备了特异性单克隆抗体(MAb),并对其抗原表位进行了鉴定,为BTV8型特异性检测方法的建立和VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础。
1 材料和方法
1.1 细胞、病毒株及实验动物 SP2/0细胞、BHK-21细胞、Sf21细胞、E.coliDH10bac感受态细胞、BTV1~24型病毒株、茨城病毒、中山病毒、赤羽病毒及抗西尼罗病毒NS1蛋白MAb 4D1均由哈尔滨兽医研究所保存;……
