王翠瑶，王忠利

辽宁医学院，辽宁锦州 121001 1生物化学与分子生物学教研室；2附属一院普外科

沉默信息调节因子1小干扰RNA抑制前列腺癌细胞DU145的迁移

王翠瑶1，王忠利2

辽宁医学院，辽宁锦州 1210011生物化学与分子生物学教研室；2附属一院普外科

目的观察沉默信息调节因子1(silent information regulator 1，SIRT1)小干扰RNA(siRNA)对前列腺癌DU145细胞迁移和基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9表达变化的影响。方法体外培养DU145细胞，实验分Scramble siRNA组和SIRT1 siRNA组；利用脂质体介导转染技术转染前列腺癌DU145细胞，Western blot方法检测DU145细胞中SIRT1的干涉效能；划痕实验、平板克隆实验和Transwell迁移实验研究SIRT1对其体外迁移运动能力的影响；Western blot方法检测DU145细胞中MMP2和MMP9的蛋白表达。结果与Scramble siRNA组比较，SIRT1 siRNA组SIRT1的蛋白表达水平降低，明显抑制DU145细胞的迁移，降低MMP2和MMP9蛋白。结论下调SIRT1的表达可以抑制前列腺癌细胞DU145的迁移，其机制可能与改变基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9的表达相关。

沉默信息调节因子1；siRNA；前列腺癌；DU145

2 细胞培养 人前列腺癌细胞DU145购自上海生命科学院细胞和生物化学研究所，生长于含10%已灭活胎牛血清的DMEM培养基中(含100 U/ml青霉素和50 U/ml链霉素)，37℃、5% CO2饱和湿度的温箱中培养，每两天换液1次，0.25%胰蛋白酶消化传代。

3 SIRT1小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)的合成和转染 针对人SIRT1(GenBank No.NM_012 238)的RNAi靶点序列：正义链5'-GAAGUUGACCU CCUCAUUGUdTdT-3'，反义链5'-ACAAUGAGGAG GUCAACUUCdTdT-3'，由上海吉玛公司纯化合成[6]。DU145细胞接种于6孔细胞培养板中，细胞转染按照Invitrogen公司的Lipofectamine 2000转染试剂说明书进行。实验分Scramble siRNA组和SIRT1 siRNA组。20 μmol/L Scramble siRNA或 SIRT1 siRNA转染细胞48 h后收集细胞进行后续实验。

4 划痕试验 将生长至融合度达90%的DU145细胞，用黄色枪头进行划痕；PBS清洗3次；利用倒置显微镜标尺，测量划痕宽度，摄像纪录；……