喜贺热 崔永强

151株血培养分离菌的分布及耐药性分析

喜贺热 崔永强

目的 了解我院血培养分离病原菌的分布及耐药情况。方法收集2012年6月-2013年12月我院门诊及住院患者的1178份血液标本，采用Bact／Alert-3D全自动血培养仪进行培养，阳性标本采用VITEK-COMPACT2全自动细菌鉴定仪进行菌种鉴定，采用K-B法及VITEK-COMPACT2定量MIC药敏分析系统进行药敏试验，并采用WHONET 5.4软件对菌种检出情况及耐药情况进行统计分析。结果1178份血液标本中共分离出病原菌151株，分离率为12.8%。151株病原菌中，革兰阴性菌97株（64.2%），革兰阳性菌49株（32.5%），真菌5株（3.3%）。97株革兰阴性菌中，分离率在前三位的为大肠埃希菌（39株，25.8%）、肺炎克雷伯菌（25株，16.6%）和马耳他布鲁菌（15株，9.9%）；49株革兰阳性菌中以金黄色葡萄球菌（24株，15.9%）和表皮葡萄球菌（8株，5.3%）为主，真菌多为白色念珠菌（4株，2.6%）。39株大肠埃希菌和25株肺炎克雷伯菌中，产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum betalactamases，ESBLs）的菌株分别为18株（46.2%，18／39）和8株（32.0%，8／25）；24株金黄色葡萄球菌中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检出率为50.0%（12／24）。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率在40.0%以上，金黄色葡萄球菌对庆大霉素、哌拉西林／他唑巴坦、头孢西丁和红霉素的耐药率在41.7%以上。结论我院血培养分离菌以革兰阴性杆菌居多，其中马耳他布鲁菌偏多是因为本地区牧民较多所致，分离病原菌的耐药情况严重，临床医师应根据细菌鉴定及药敏试验选择敏感药物治疗。

血培养；分离菌；抗生素；耐药性

当病原微生物通过各种途径进入血液，并通过血液播散至全身时，可引起各种临床症状如菌血症，若不及时救治，可能危及患者生命。因此，及时检出血液中的病原微生物，对血液感染的诊断、治疗及预后有重要的临床意义。血培养分离菌的分布及耐药性分析可以更好地帮助指导临床科学合理用药，及时治愈患者。本文对我院近年来收集的血液标本进行回顾性分析，为院内感染控制及本地区菌种分布情况提供实验室依据，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源收集我院2012年6月-2013年12月门诊及住院患者的血液标本1178份，剔除同一患者相同部位的重复菌株，采用全自动血培养仪进行分离培养，共分离出151株病原菌。

1.2 仪器与试剂采用Bact／Alert-3D全自动血培养仪及其配套专用培养瓶（法国生物-梅里埃公司生产）和VITEK-COMPACT2全自动细菌鉴定系统（法国生物-梅里埃公司生产）进行细菌的分离培养及鉴定。血平板、麦康凯平板、巧克力平板、M-H平板、念珠菌显色平板均购自法国生物梅里埃公司。药敏纸片阿莫西林／棒酸、复方新诺明、头孢曲松、头孢西丁、氨苄西林／舒巴坦、头孢吡肟、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦、左氧氟沙星、阿米卡星、红霉素、氯霉素、苯唑西林、万古霉素、头孢他啶及克林霉素均购自英国Oxoid公司和美国BD公司。

1.3 方法

1.3.1 标本采集当患者发热（≥38℃）或低体温（≤36℃），或外周血白细胞计数超过10×109／L（特别是存在核左移时），或绝对粒细胞值降低（成熟中性粒细胞计数少于1×109／L），或合并有明显感染症状体征、伴有感染病灶存在时，即进行无菌采集血液，成人采血量为10～15ml、儿童采血量为1～5ml，注入血培养专用瓶内，混匀后立即送检。

1.3.2 细菌培养及分离全自动血培养仪培养5 d未报警且转种培养皿观察无细菌生长者视为阴性；血培养仪显示阳性标本则转种血平板和麦康凯平板，必要时转种巧克力平板或念珠菌显色平板，置于35℃，5%～10%的CO2培养箱孵育24-48 h后观察菌落形态，并同时涂片行革兰染色镜检，将镜检结果报告临床医生（初报）。

1.3.3 菌株鉴定与药敏试验采用VITEK-COMPACT2系统和API鉴定细菌，药敏分析采用K-B纸片扩散法和VITEK-COMPACT2定量MIC药敏分析系统。K-B法用游标卡尺测量抑菌环直径，参照CLSI2011版标准判读结果。

1.3.4 质量控制质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠埃希菌ATCC 25922和铜绿假单胞菌ATCC 27853，均购自卫生部临检中心。每次药敏试验应将标准菌株和待测菌株在同一条件下进行，标准菌株的抑菌圈应在CLSI2011版允许的预期范围内。

1.3.5 产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum beta-lactamases，ESBLs）确证试验及结果判读双纸片协同扩散法，用头孢他啶＋阿莫西林／棒酸＋头孢噻肟，其中一侧发生协同扩散则为ESBLs阳性。

1.4 统计学处理采用WHONET 5.4软件对数据进行统计，计算各菌种的株数、分离率和耐药率。

2 结果

2.1 血培养阳性分离菌的菌种分布1178份血液标本中，经血培养分离出病原菌151株，分离率为12.8%，其中革兰阴性菌97株（64.2%），革兰阳性菌49株（32.5%），真菌5株（3.3%）。革兰阴性菌中，分离率最高的为大肠埃希菌（39株，25.8%），其次为肺炎克雷伯菌（25株，16.6%）和马耳他布鲁菌（15株，9.9%）。革兰阳性菌中，分离率最高的为金黄色葡萄球菌（24株，15.9%）和表皮葡萄球菌（8株，5.3%），见表1。

表1 151株病原菌的菌种分布情况（%）

2.2 血培养常见革兰阴性菌的药敏试验结果39株大肠埃希菌耐药率最高的是庆大霉素和环丙沙星，均为64.1%；耐药率最低的为亚胺培南（2.6%）。25株肺炎克雷伯菌耐药率最高的为庆大霉素和左氧氟沙星，均为48.0%；耐药率最低的为氯霉素和亚胺培南，均为4.0%，见表2。

表2 血培养常见革兰阴性菌对抗生素的耐药率［n（%）］

2.3 血培养常见革兰阳性菌的药敏试验结果24株金黄色葡萄球菌耐药率最高的为哌拉西林／他唑巴坦（58.3%），而对氯霉素未出现耐药情况，即敏感率为100.0%，见表3。

表3 血培养常见革兰阳性菌对抗生素的耐药率（%）

2.4 产ESBLs菌株的检出率在39株大肠埃希菌中，检出产ESBLs菌株为18株，检出率为46.2%；在25株肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs菌株8株，检出率为32.0%。

2.5 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcusaureus，MRSA）的检出率在24株金黄色葡萄球菌中，检出MRSA为12株，检出率为50.0%。

3 讨论

我院2012年6月-2013年12月送检的1178株血培养标本中，分离出病原菌151株，分离率为12.8%，与国内多家医院报道［1-3］相似。151株血培养分离菌中，分离率排名前五位的分别为大肠埃希菌（25.8%）、肺炎克雷伯菌（16.6%）、金黄色葡萄球菌（15.9%）、马耳他布鲁菌（9.9%）和表皮葡萄球菌（5.3%），与文献［4，5］报道的排名前5位的病原菌有差异，本文研究中马耳他布鲁菌的检出率较高，而其他地区该菌的检出率很低，这与内蒙古医科大学附属医院的报道［6］相近。产生这种差异的主要原因是内蒙古地区发展畜牧业的人群较多，而布鲁菌的传播途径有两种，一是通过血液，二是通过呼吸道，如果皮肤有伤口且没有完全愈合时接触了患病牲畜的血液，就会感染；另外，患病牲畜的皮屑和毛发被人类吸入呼吸道，也会引起感染，所以本地区人群感染布鲁菌的概率较大。

大肠埃希菌是临床感染中最常见的革兰阴性杆菌，也是医院常见的病原菌，可引起人体各部位的感染，其中以尿路感染为主，还可引起菌血症、肺炎、新生儿脑膜炎、胆道感染、手术后腹腔感染及灼伤创面感染等。肺炎克雷伯菌也是医院感染条件致病菌之一，由该菌引起的感染日益增多，其为革兰阴性杆菌，可引起典型的原发性肺炎，也可引起各种肺外感染，包括婴儿肠炎和脑膜炎、成人医源性泌尿道感染、外伤感染和菌血症。金黄色葡萄球菌为医院感染中常见的革兰阳性球菌，其毒力最强，能产生各种侵袭性酶及毒素，培养菌落中有明显的溶血环，可引起全身各部位的感染，包括中枢神经系统的感染和菌血症等，也是医院交叉感染的重要来源。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率在40.0%以上，对氯霉素、亚胺培南和头孢吡肟均较为敏感（敏感率大于90%）。在革兰阴性杆菌中，随着三代头孢菌素的临床应用，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的广谱酶TEM-1和SHV-1很快发生改变，形成ESBLs，从而使细菌的耐药谱从青霉素、窄谱头孢菌素扩大到青霉素、窄谱和广谱头孢菌素以及单环类药物，产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌不论其体外药物敏感试验结果如何，临床治疗中对青霉素、头孢菌素和氨曲南治疗均无效，因此检测产ESBLs菌株的检出率非常重要。本文研究中，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株的检出率分别为46.2%和32.0%，与文献［7］报道差异不大。

分离出的布鲁菌一般不做药敏试验，临床治疗需要长时间的抗生素治疗，一般首选利福平和多西环素联合使用，或四环素与利福平联用。

本文研究结果显示，分离出的24株金黄色葡萄球菌对庆大霉素、哌拉西林／他唑巴坦、头孢西丁和红霉素的耐药率均在41.7%以上，其中MRSA的检出率为50.0%，与文献［8］报道的46.0%基本相符。对于MRSA，不论其体外药敏试验结果如何，所有的β-内酰胺类药物和β-内酰胺／β-内酰胺酶抑制剂均显示临床无效。

综上所述，我院血培养分离病原菌的菌种分布较广泛，近年来，由于广谱抗生素的滥用，血培养分离菌对常用抗菌药物的耐药情况仍十分严重，通过对血培养分离菌分布和耐药情况及时的监测，来合理应用抗菌药物，进行针对性的治疗，以减少耐药菌的产生，对挽救患者生命和提高诊疗水平起着重要的作用。

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7 孙杰，徐鸣皋，徐娟，等.血培养常见分离病原菌分布及耐药性分析.中华临床医师杂志，2011，5：6470-6472.

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Distribution and antim icrobial resistanceanalysisof151 strains isolated from blood

XI He-re1，CUI Yong-qiang2.1DepartmentofClinical Laboratory，Bayannaoer Hospital，Bayannaoer015000，China2DepartmentofClinical Laboratory，Bayannaoer Central Blood Stations，Bayannaoer015000，China

ObjectiveTo investigate the distribution and drug resistance of blood culture isolated bacteria in ourhospital.Methods1178 strainsblood samplewere collected in ourhospital from June 2012 to December 2013.Blood sample were cultivated by the Bact／Alert-3D automatic blood culture system.The positive strainswere identified by VITEK-COMPACT2 automatic bacterial identification instrument.The drug sensitivity testwere detected by K-B method and VITEK-COMPACT2 quantification MIC drug sensitivity analysis system.All data were analyzed by WHONET 5.4 software.Results151 strains of bacteria were isolated from 1178 blood samples，and the isolated rate was 12.8%.In 151 strains of bacteria，the gramnegative bacteriawas 97 strains（64.2%），gram-positive bacteriawas 49 strains（32.5%），and fungiwas 5 strains（3.3%）.In 97 strains of gram-negative bacteria，isolated rates of top threewere Escherichia coli（39 strains，25.8%），Klebsiella pneumoniae（25 strains，16.6%）and Brucellamelitensis（15 strains，9.9%）.In 49 strainsofgram-positivebacteria，isolated ratesof top twowere Staphylococcusaureus（24 strains，15.9%）and Staphylococcusepidermidis（8 strains，5.3%）.Themostly of fungiwereCandida albicans（4 strains，2.6%）.In 39 strains of Escherichia coli and 25 strainsKlebsiella pneumoniae，isolated rate of extended spectrum betalactamases were 46.2%（18／39）and 32.0%（8／25），respectively.In 24 strains ofStaphylococcus aureus，isolated rate of methicillin-resistantStaphylococcus aureuswas 50.0%（12／24）.The resistant rates of Escherichia coli andKlebsiella pneumoniaeto gentamicin，levofloxacin and ciprofloxacin were over 40.0%，and resistant rates ofStaphylococcus aureusto gentamicin，piperacillin／tazobactam，cefoxitin and erythromycin were over 41.7%.ConclusionThe gram-negative bacteria aremajority in the blood culture isolated bacteria.The mroe herdsman in our region result in the much moreBrucella melitensis.The drug resistance is serious，clinicians should be based on the identification of bacteria and drug sensitivity test to selectsensitive drugs.

Blood culture；Bacteria；Antibiotics；Drug resistance

10.3969／j.issn.1674－7151.2014.04.010

2014-06-19）

（本文编辑：李霦）

015000 巴彦淖尔市，巴彦淖尔市医院检验科（喜贺热）

015000 巴彦淖尔市，巴彦淖尔市中心血站（崔永强）