刘 田，廖申权，戚南山，吴彩艳，李 娟，吕敏娜，李国清，孙铭飞

（1.华南农业大学兽医学院，广州 510640；2.广东省农业科学院动物卫生研究所，广州 510640）

柔嫩艾美耳球虫G6-PI基因的克隆、序列分析与原核表达

刘 田1,2，廖申权2，戚南山2，吴彩艳2，李 娟2，吕敏娜2，李国清1，孙铭飞2

（1.华南农业大学兽医学院，广州 510640；2.广东省农业科学院动物卫生研究所，广州 510640）

为研究柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose- 6-phosphate isomerase, G6-PI）的生化特性，本研究对其基因进行了克隆和原核表达。根据NCBI已公布的E. tenellaHoughton株G6-PI的基因序列（GI: 298161921）设计特异性引物，运用RT-PCR方法扩增EtG6-PI基因序列，并将其克隆到表达载体pColdI、pCold43a中，构建重组质粒pColdIEtG6-PI、pCold43a-EtG6-PI，经测序鉴定正确后，将其转化感受态细胞E. coliRosetta (DE3)，并进行IPTG诱导表达。结果表明，E. tenellaG6-PI的ORF序列（1650 bp），编码550个氨基酸；重组菌pColdI-EtG6-PI、pCold43a-EtG6-PI均能成功诱导表达，其中pCold43a-EtG6-PI表达部分可溶性蛋白，表达产物纯化后可用于酶生化特性分析。柔嫩艾美耳球虫G6-PI基因的成功克隆表达为该酶的功能研究奠定了基础。

柔嫩艾美耳球虫；葡萄糖-6-磷酸异构酶；克隆；原核表达

鸡球虫病是由一种或几种艾美耳球虫感染引起的以肠道病变为主的寄生虫病，严重危害集约化养鸡业的发展，每年因此造成的经济损失高达25亿英镑以上[1]。柔嫩艾美耳球虫（E. tenella）是致病力最强的病原之一，可引起雏鸡血便，食欲减退，蛋鸡产蛋下降等症状。目前鸡球虫病的防控仍然是以药物预防为主，但鸡球虫广泛而严重的抗药性极大影响了球虫药的防治效果，生产上迫切需要新型抗球虫药物。近年来，基于药物靶标的药物筛选已成为当今药研发的主流方法，药物靶标的功能解析成为研制新型药物最为重要的一环。……