王艳歌，董 辉，韩红玉，赵其平，朱顺海，李榴佳，吴有陵，黄 兵

（中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点实验室，上海 200241）

柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

王艳歌，董 辉，韩红玉，赵其平，朱顺海，李榴佳，吴有陵，黄 兵

（中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点实验室，上海 200241）

为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶（Eimeria tenellaLactate dehydrogenase，EtLDH）的真核表达质粒，分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板，PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因，PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接，构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达，分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带，间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ，并能在真核细胞中表达，为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。

柔嫩艾美耳球虫；乳酸脱氢酶；IFN-γ基因；293T细胞；真核表达

球虫病是鸡场中最普遍、损失最严重的疾病之一，每年给全世界养殖业造成的直接经济损失高达5亿英镑[1]。我国鸡球虫病的发病率较高，尤其是15～50日龄的雏鸡，严重时死亡率可达80%[2]。目前，鸡球虫病的防治主要以抗球虫药物为主，但随着药物的不断使用，球虫抗药性日益严重[3]，兽药残留等引起的食品安全问题也日益受到人们的重视，所以迫切需要更为理想的防治球虫病方法。……