周继文，王恒，周扬，陈文昭，汪桃芳，刘志礼，付达华

0 引言

骨肉瘤是多发于青少年的一种增殖及侵袭性极强的恶性肿瘤，早期转移是其一大特点，肺部转移成为骨肉瘤患者死亡最主要的原因。已有研究证实印尼蛇接骨草醇提取物能诱导骨肉瘤细胞凋亡，抑制其增殖［1］。在本实验中，我们进一步探讨了蛇接骨草醇提取物对骨肉瘤细胞U2-OS迁徙、侵袭力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料蛇接骨草购于江西南丰印尼蛇接骨草种植基地，提取方法见文献［1］。骨肉瘤细胞株U2-OS购自中国医学科学院肿瘤研究所，并由南昌大学第一附属医院医学中心冻存。F12型培养基购自美国Hyclone公司;胎牛血清(FBS)购自杭州四季青生物工程有限公司;PBS购自北京百灵威化学试剂有限公司;胰蛋白酶冻干粉(含EDTA)购自美国Sigma公司;DMSO、MTT购自美国Sigma公司，Transwell趋化板购于Costar公司(8.0μm Pore Size)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞贴壁生长于含10%FBS的F12型培养液中，其中青霉素100 U/mL、链霉素100 mg/mL，于37℃、5%CO2的饱和湿度孵育箱中培养。待细胞长至约80%满后，弃去旧培养基，以适量胰酶(0.25%胰蛋白酶:0.02%EDTA=1∶1)消化细胞，弃去消化液并加入适量培养基洗涤，再以适量培养基反复轻轻吹打后制备细胞悬液，计数，以1∶4的比例传代培养。

1.2.2 Wound healing迁徙实验取对数生长期细胞进行实验;用0.25%胰酶消化细胞，含10 g/L BSA的无血清DMEM-F12培养液重悬，调整细胞浓度5×105/mL，接种于6孔细胞培养板，予以2种不同浓度(0、40 μg/mL)的GPE作用细胞24 h后，用200 μL枪头在单层细胞表面孔中划一直线。用PBS漂洗2次以去除划下的悬浮细胞;加入无血清DMEM-F12培养液(内含1%BSA)继续培养24 h，倒置显微镜下观察划痕中细胞迁徙情况并照相;Image J分析软件进行迁徙距离测量，计算各组细胞迁徙率。……