刘阳，高德玉，张萍，徐敏，李晓军

0 引言

分化抑制因子又称DNA结合抑制因子(inhibitors of differentiation/DNA binding，Id)，属于螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix，HLH)转录因子家族成员之一，其本身缺乏DNA结合必需的碱性结构域，与碱性HLH(basic helix-loop-helix，bHLH)结合成异二聚体后，可抑制bHLH与DNA及其他组织特异性bHLH结合，从而负调节bHLH转录因子，抑制细胞分化。目前共发现4种Id分子，即Id1、Id2、Id3和Id4，在真核生物中，Id蛋白在胚胎发育、细胞生长、肿瘤血管形成、侵袭和转移等方面发挥重要调控作用［1］。

Id3基因参与多种细胞生物学过程［2］，包括淋巴细胞成熟和发育、血管内皮和平滑肌细胞增殖和分化、胚胎心血管及神经系统发育和形成等［3］。Id3在细胞中的表达模式和调控机制与Id1不完全相同，Id3在不同类别的肿瘤组织和肿瘤细胞系中具有截然不同的表达模式，在原发性结直肠癌、小细胞肺癌细胞中呈高表达［4］，而在甲状腺癌、卵巢癌、前列腺癌中表达水平低下［5］;在肝病或肝癌中，其表达模式更加复杂，在分化良好的肝癌细胞中Id3的表达水平高于分化不良的肝癌细胞［6］。

为进一步探讨Id3基因在肺腺癌细胞中的作用，本实验在前期构建真核表达载体pEGFP/Id3的基础上，观察Id3转基因表达对A549细胞迁移、侵袭、增殖和凋亡的影响，为进一步研究Id3对A549细胞功能的影响及其分子机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料人肺腺癌A549细胞由南京军区南京总医院中心实验科保存，PCR仪由eppendorf公司生产，荧光倒置显微镜购于Olympus公司，RT-PCR试剂盒购自Fermentas公司，TRIzol试剂购自Takara公司，质粒抽提试剂盒购自QIAGEN公司，LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司，DMEM培养基、胎牛血清购自Hyclone公司，OPTI MEM购自GIBCO公司。……