田迎，滕兆刚，卢光明，郑玲

0 引言

近年来，纳米材料在医药领域的研究越来越广泛，如修饰后具有荧光或磁性性能的纳米颗粒能够用于细胞标记、示踪、造影;装载药物的介孔纳米材料可以实现药物转运及靶向治疗［1－4］。与此同时，纳米材料的生物安全性也受到关注，其大小与表面物化性质都是决定细胞毒性的重要因素［5－8］。纳米材料的分散性对于细胞凋亡的研究还未见报道。本文通过制备2种分散性不同的介孔二氧化硅纳米材料(mesoporous silica nanomaterials，MSNs)，初步探索其对人胚肾细胞系293T细胞吞噬以及凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料MSN-1、MSN-2为本实验室滕兆刚博士制备合成，人胚肾细胞系293T细胞购自ATCC(American type culture collection)细胞库，DMEM培养基、青链霉素双抗溶液、胎牛血清及胰酶购自美国GIBCO公司，Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。

1.2 主要方法

1.2.1 MSN-1、MSN-2的制备和表征MSN-1、MSN-2

分别参照文献［9－10］的方法制备。MSN-1、MSN-2利用透射电镜方法进行表征，加速电压为200 kV。首先配制0.05 g/L纳米粒的乙醇溶液，超声分散均匀后，滴于覆盖有膜的铜网上，真空干燥后，于Hitachi H-8100型透射电子显微镜下拍摄，观察纳米粒的尺寸及分散性。

1.2.2 细胞培养293T细胞于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的DMEM培养基中培养，37℃、5%CO2培养箱中孵育，每48h传代1次。

1.2.3 透射电镜观察293T细胞对MSN-1、MSN-2的摄取待293T细胞汇合度达70%时，分别加入混合均匀的MSN-1、MSN-2，使其终浓度为100 μg/mL，孵育24 h，清洗消化，收集细胞，用2.5%戊二醛固定、1%锇酸后固定1 h，丙酮脱水，Epon-812树脂包埋，45～65℃聚合48h，半薄切片定位，70nm超薄切片，醋酸铀—柠檬酸铅双重电子染色，JEM-1011型透射电镜观察细胞对材料的吞噬结果。……