熊建军，龚帧，周小鸥，王庭，刘建云，李卫东

（1.九江学院基础医学院药理学教研室，江西九江332000；2.江西省系统生物医学重点实验室，江西九江332000）

转录因子RUNX2对IPO8基因启动子的调节作用

熊建军1，龚帧1，周小鸥1，王庭1，刘建云2，李卫东2

（1.九江学院基础医学院药理学教研室，江西九江332000；2.江西省系统生物医学重点实验室，江西九江332000）

目的研究转录因子RUNX2对IPO8基因启动子的调控作用。方法基于PCR技术，分别突变和剔除IPO8基因启动子片段P-732/+134上RUNX2结合位点（-497～-502 bp），改造后的启动子片段定向插入荧光素酶表达载体PGL⁃3 Basic。重组质粒分别转染Saos⁃2与HeLa细胞，检测报告基因荧光素酶活性。应用染色质免疫共沉淀（ChIP）证实RUNX2与IPO8启动子在Saos⁃2细胞内结合。慢病毒介导RUNX2在Saos⁃2细胞的靶向沉默，定量PCR检测相应组别中IPO8mRNA的表达。结果成功突变和剔除IPO8启动子上RUNX2结合位点，破坏RUNX2结合位点导致IPO8启动子活性在Saos⁃2细胞中显著下降（P＜0.05）。转录因子RUNX2在Saos⁃2细胞与IPO8启动子有效结合，下调RUNX2的表达导致IPO8转录水平下降（P＜0.05）。结论转录因子RUNX2正性调控IPO8基因的转录。

IPO8；RUNX2；启动子；荧光素酶

IPO8基因是核质转运受体Importin β基因家族成员之一［1］。既往研究认为，IPO8是一个在细胞内稳定表达的基因，并在多种肿瘤细胞中作为参照基因用于PCR检测［2，3］。但是近来研究显示IPO8蛋白的功能并不局限于核质转运，有文献报道，IPO8的表达与众多microRNA介导的基因沉默有着复杂的联系，而抑制IPO8表达可导致部分microRNA靶基因上调［4］，进而影响细胞内多个基因的表达水平。由此可见，IPO8的表达对于细胞的生理活动可能具有重要意义，但是IPO8基因表达的调控机制尚未见研究报道。……