人巨细胞病毒微小RNA miR⁃UL70⁃5P靶向抑制人即刻早期反应蛋白3的表达

2014-03-21柳中洋齐莹郭鑫蒋树娟黄郁晶邵耀中阮强

中国医科大学学报 2014年7期

关键词：实验检测

柳中洋，齐莹，郭鑫，蒋树娟，黄郁晶，邵耀中，阮强

（中国医科大学附属盛京医院病毒研究室，沈阳110004）

·论著·

人巨细胞病毒微小RNA miR⁃UL70⁃5P靶向抑制人即刻早期反应蛋白3的表达

柳中洋，齐莹，郭鑫，蒋树娟，黄郁晶，邵耀中，阮强

（中国医科大学附属盛京医院病毒研究室，沈阳110004）

目的寻找人巨细胞病毒微小RNA miR⁃UL70⁃5P调控的靶mRNA，检测miR⁃UL70⁃5P对靶mRNA蛋白质表达的调节作用。方法采用Hybrid⁃PCR方法从人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞总RNA中筛选候选靶mRNA；采用荧光素酶实验验证miR⁃UL70⁃5p与候选靶mRNA的结合能力；采用Western blot方法检测转染miR⁃UL70⁃5P对部分靶mRNA蛋白质表达的调节作用。结果筛选并鉴定了人即刻早期反应蛋白3（IER3）等7种靶mRNA可与miR⁃UL70⁃5P特异性结合；在293T细胞中过表达的IER3可以被转染的miR⁃UL70⁃5P下调30%。结论人巨细胞病毒表达的miR⁃UL70⁃5P在病毒感染宿主过程中具备抑制IER3蛋白质表达的能力。

人巨细胞病毒；微小RNAs；人即刻早期反应蛋白3

微小RNAs（microRNAs，miRNAs）是一类长度为22个碱基的核糖核酸，虽然不能够翻译表达蛋白质，但可以通过与信使RNA反向互补结合，阻碍其翻译过程［1］。现已发现miRNAs在生命活动的各个方面发挥着精细的调节作用［2］。miRNAs在病毒中也有表达。人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）是人群感染率高达90%以上的DNA病毒。依据miRBase提供的资料，目前已经发现HCMV表达包括miR⁃UL70⁃5P在内的26种miRNAs。但是，miR⁃UL70⁃5P的生物学功能目前尚不清楚。本研究拟寻找HCMV miR⁃UL70⁃5P调控的靶mRNA，检测miR⁃UL70⁃5P对靶mRNA蛋白质表达的调节作用。