周桂骞黄述斌

◇医学基础与药学研究◇

甲状腺乳头状癌标记物选择

周桂骞1黄述斌2

目的：寻找更好的标记物，用于甲状腺乳头状癌的诊断与鉴别。方法：选取PTC 78例，NGWPH 32例，蜡块均带有周围正常甲状腺组织作对照，采用CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56对样本进行免疫组化染色。结果：CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56在PTC中的阳性表达率分别为100.0%、93.6%、92.3%、98.7%和1.3%。而在NGWPH中的阳性表达率分别为12.5%、3.1%、37.5%、12.5%和96.9%。两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：5种抗体各有优缺点，CK19、34βE12、CD56的应用价值较高，若能再联合使用MC和Galectin-3以及仔细的图像观察，可以增加PTC诊断及与NGWPH鉴别诊断的准确性。

甲状腺肿瘤 乳头状癌 病理诊断

甲状腺乳头状癌（PTC）是甲状腺最常见的恶性肿瘤，WHO将其定义为显示滤泡细胞分化证据并具有独特细胞核特征的恶性上皮性肿瘤。有些PTC单凭HE染色镜下难以与结节性甲状腺肿伴乳头状增生（NGWPH）区别。本研究旨在通过检测CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56在PTC与NGWPH中的表达情况，探讨其在两者鉴别诊断中的应用。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集2009年5月~2013年9月我院及池州市人民医院存档的110例经10%中性甲醛固定、石蜡包埋的甲状腺标本，其中男34例，女76例，年龄17~79岁。包括PTC 78例，NGWPH 32例，选取蜡块均带有周围正常甲状腺组织以作对照。诊断标准为2004版甲状腺肿瘤WHO组织学分类。切片经HE染色后观察病理组织学形态。

1.2 免疫组化染色 应用Envision二步法采用CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56对样本进行免疫组化染色，具体步骤按说明书进行，DAB显色。用已知的阳性组织切片作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。所用 CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56鼠抗人单克隆抗体与检测试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 结果判定 CK19、34βE12和Galectin-3定位于细胞质内，Galectin-3偶可定位于细胞核，MC定位于细胞膜，CD56定位于细胞膜伴/不伴细胞质。参照Beesley[1]分级方法按阳性细胞所占百分比并参考着色强度确定分级。阳性表达包括（+）~（+++）。1.4 统计学方法 用SPSS11.5软件进行统计学处理。率的比较行x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。真实性指标计算方法：灵敏度Se=a/(a+c)×100%；特异度Sp=d/(b+d)×100%；准确度=(a+d)/(a+b+c+d)× 100%。其中a为真阳性例数，b为假阳性例数，c为假阴性例数，d为真阴性例数。

2 结果

2.1 临床与病理资料 78例PTC，肿瘤最大径为0.8cm~6.5cm，伴有淋巴结转移者58例，无淋巴结转移者12例，有8例未行淋巴结清扫。所有PTC病例镜下均具有Juan Rosai[2]所描述的全部或部分细胞核特征。32例NGWPH的病例中，各例均有囊性变，囊内可见乳头状结构。其中10例细胞核染色淡，似毛玻璃样。

2.2 免疫组化结果 PTC组与NGWPH组之间比较：CK19，x2=91.55，P＜0.01；34βE12，x2=84.35，P＜0.01；MC，x2=37.76，P＜0.01；Galectin-3，x2=86.89，P＜0.01；CD56，x2=100.5，P＜0.01。PTC组与NGWPH组之间Pearson Chi-Square:Value=3.36E2，P＜0.01，两组之间差异极显著。见表1。

表1 甲状腺组织中CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56的免疫组化阳性表达

2.3 5种抗体的灵敏度、特异度和准确度比较 根据统计学处理中的公式计算CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56的灵敏度、特异度和准确度，结果见表2。

表2 5种指标的灵敏度、特异度和准确度比较 （%）

3 讨论

PTC是甲状腺恶性肿瘤中最常见的一种，而甲状腺良性病变中也常常可见乳头状结构。故有时仅凭HE染色难以区分良恶性，这时就需要一些可靠的标记物来协助PTC的诊断与鉴别诊断。

滕晓东等[3]认为CK19阳性表达是滤泡细胞增生恶变的主要标志。但Michel R Nasr等[4]研究发现，虽然CK19在乳头状癌中100%表达，其在正常甲状腺、乳头状增生、滤泡性腺瘤等一些良性病变中也有较高的表达率（68%），提示CK19标记虽然对PTC有很高的敏感性，但是特异性不高。本组研究结果与文献相似，显示除实体亚型PTC表达较弱外，其余PTC病例均有CK19的强表达，但有34.5%的癌周滤泡及结节性甲状腺肿的滤泡弱表达CK19。本组实验中发现34βE12在PTC的表达率为93.6%，而NGWPH仅1例灶性表达，其特异度为96.9%，显示这种抗体在PTC的诊断与鉴别诊断中可以发挥很好的作用。

MC和Galectin-3抗体在PTC的诊断中研究较多，文献报道的数据差异较大[4~5]。我们的数据显示MC在PTC的表达率为92.3%，在NGWPH也有37.5%的表达率，特异度为五种抗体中最低，与文献报道符合。不同的实验结论显示Galectin-3在PTC中的表达率为82%~100%。本组实验显示在PTC中表达率为98.7%，但在NGWPH和正常甲状腺中也有一定的表达，灵敏度为98.7%，特异度为87.5%，准确度为95.5%，提示其应该在诊断中有一定的价值。

我们的研究发现除1例滤泡亚型PTC有CD56的弱表达外，其余77例PTC均不表达CD56，32例NGWPH病例的乳头状增生区除未见表达外，其余均为强阳性表达CD56，所有标本周围正常甲状腺组织均有CD56的强阳性表达。其灵敏度为98.7%，特异度为96.9%，准确度为98.2%，说明在PTC的诊断中CD56是一个非常有意义的抗体。

综上所述，在部分PTC的诊断中需要借助于免疫组化技术，但是没有抗体能在灵敏度、特异度、准确度上达到100%，这时就需要使用一组抗体来鉴别，以期获得满意的效果。综合各项数据显示，CK19、34βE12、CD56的应用价值较高，若能再联合使用MC和Galectin-3以及仔细的图像观察，可以增加PTC诊断及与NGWPH鉴别诊断的准确性。

1 BeesleyMF，MclrenKM．Cytokeratin19 and galectin-3immunohistochemistry in the differential diagnosis of solitary thyroid nodules[J]．Histopathology，2002，41(3)：236～243．

2 Juan Rosai．Papillary Thyroid Carcinoma:A Rootand-Branch Rethink[J]．Am J Clin Pathol，2008，130（5）：683～686．

3 滕晓东，王丽君，姚洪田，等．细胞角蛋白19、galectin-3、HBME-l在甲状腺病变上的表达及鉴别诊断意义[J].中华病理学杂志，2004，33(3)：212～216.

4 MichelRNasr，SanjayMukhopadhyay，ShengleZhang，etal．Immunohistochemicalmarkersin diagnosis ofpapillarythyroidcarcinoma：utilityofHBME1combinedwith CK19 immunostaining [J]．Modern Pathology,2006,19: 1631～1637.

5 JE Barroeta，MD，ZW Baloch,MD,PHD，et al．Diagnostic Value of Differential Expression of CK19, Galectin-3,HBME-1,ERK,RET,and p16 in Benign and Malignant Follicular-Derived Lesions of the Thyroid:An Immunohistochemical Tissue Microarray Analysis[J]．Endocrine Pathology,2006,17(3):225～234.

Selection of markers in papillary thyroid carcinoma

1.Chizhou Second People's Hospital，Chizhou 247100，Anhui
2.Chizhou People's Hospital，Chizhou 247100，Anhui
ZHOU Gui-qian1,HUANG Shu-bin2

Objective:To search for a better marker for papillary thyroid cancer diagnosis and identification.．Methods:Select PTC 78 example and NGWPH 32 cases,the wax block with the surrounding normal thyroid tissue were used as control,the use of CK19,34βE12,MC,Galectin-3 and CD56 on the samples immunohistochemical staining.Results:CK19,34βE12,MC,Galectin-3 and CD56 positive expression in PTC rates were 100.0%,93.6%, 92.3%,98.7%and 1.3%.In NGWPH the positive expression rate was 12.5%,3.1%,37.5%,12.5%and 96.9%. Difference between the two groups was statistically significant(P＜0.05).Conclusions:Five kinds of antibodies have their advantages and disadvantages,CK19,34βE12,CD56 high application value,if then combined with MC and Galectin-3 as well as careful observation of the image,you can increase the PTC diagnosis and differential diagnosis accuracy with NGWPH.

Thyroid neoplasms；Papillary carcinoma；Pathological diagnosis /(编审：牛俊杨 施仲赋)

R736.1

A

1671－8054(2014)01-0088-02

1.池州市第二人民医院病理科 安徽 247100

2.池州市人民医院病理科 安徽 247100

2013-12-05收稿，2014-01-04修回