乔 正，赵 健，潘林鑫，李春雨，徐雪琴，刘晓颖，范礼斌

◇基础医学研究◇

人RACK1蛋白在HEK-293T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位

乔 正，赵 健，潘林鑫，李春雨，徐雪琴，刘晓颖，范礼斌

目的构建可以表达有活性的蛋白激酶C受体（RACK1）的重组质粒，检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物，以RACK1全长cDNA序列为模板，PCR扩增出RACK1序列，分别构建到载体pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞（HEK-293T）和非洲绿猴肾成纤维细胞（COS7细胞），转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达，Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况，免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了pcDNA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。Western blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达，考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达，免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达，在COS7细胞的胞质、胞核均有分布，为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。

RACK1；基因表达；细胞定位；BL21

有活性的蛋白激酶C受体（repector for activated C kinase，RACK1）是一种分子量为36 ku的G蛋白β亚单位的同源物，是WD-40蛋白家族中的一个成员。编码基因定位于5q35.3，是RACKS家族中第一个被识别的成员［1］，并且RACK1蛋白从衣藻到人类都是保守的。后来因为其结构与哺乳动物G蛋白异源三聚体β亚基有同源性，故又被称为GNB2L1，即鸟苷酸结合蛋白β2样因子1。近来有研究［2］表明，RACK1可结合多种胞质蛋白或亚细胞结构，参与多条代谢通路，发挥不同的生理作用。该研究构建了真核表达载体pcDNA3.1-FLAGRACK1，将其转染至HEK-293T、COS7细胞中，并且构建了pGEX-5X-3-RACK1，转化到BL21感受态细胞中，观察RACK1在细胞中的表达及其分布情况。……