张月梅 颜春鲁 刘永琦 苏 韫 范 萍 吴晓晶 董介正

视网膜缺血是视网膜光感受器细胞层凋亡的主要原因之一，是严重威胁视力的临床常见眼底疾病，至今仍无有效的治疗方法来阻止或逆转这类疾病的退行性改变。寻找非视网膜来源的、可替代视网膜光感受器细胞功能的细胞作为理想移植供体是目前需要攻克的难题。

骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）具有向心肌细胞、神经干细胞样细胞等分化能力〔1〕，已成为骨科、心血管科、神经科、眼科等治疗的主要种子细胞之一〔2-4〕。中医药素有滋阴补阳、强身壮体、增智健脑、抗衰老和调节免疫功能之功效。本课题用不同补肾法（补益肾阴法、阴阳双补法、补益肾阳法）代表方药左归丸、地黄饮子、右归丸含药血清孵育BMSCs，观察不同补肾方药对BMSCs的诱导分化作用，从而筛选出可高效诱导BMSCs向神经元样细胞分化的补肾法及代表方药。

1 材料和方法

1.1 实验动物

提取BMSCs的动物：SPF级Wistar大鼠15只，雌雄不限，体重（120±10）g。制备含药血清的动物：SPF 级 Wistar大鼠 40 只，雌雄不限，体重（250±20）g。以上动物皆由甘肃中医学院实验动物中心提供，实验动物质量合格证号：SCXK（甘）2004-0006。

1.2 实验药物

左归丸、右归丸、地黄饮子均购自甘肃中医学院附属医院药剂科，经中药教研室鉴定，均为正品。

1.3 主要药品试剂与仪器

L-DMEM 培养基（GⅠB-CO Ⅰnvitrogen Corporation，批号1240031），胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司，批号 090123），0.25%胰酶（Sigma），L-谷氨酰胺（上海新兴医药保健品科技开发中心，批号 991085），全反式维甲酸（Sigma），CD45 荧光标记抗体（Gibco公司），CD90荧光标记抗体（Gibco公司），Nestin、NSE、GFAP 免疫组化试剂盒；……