陈岳涛 曹 蔚 谢艳华 孙纪元 王四旺 叶青雅

第四军医大学药学系天然药物学教研室 （西安710032）

元胡止痛片由中药延胡索（Rhizoma Corydalis）和白芷（RadixAngelica dahuricae）组成，为2010年药典收录的标准制剂，主要功能为理气、活血、止痛，用于气滞血瘀的胃痛、胁痛、头痛及月经痛。本实验以“分子中药”理念［1，2］为指导，分别选取延胡索和白芷中主成分即延胡索乙素和欧前胡素，采用痛经模型大鼠［3］，比较元胡止痛片、单味中药提取物单用及配伍、处方主成分单用及配伍的镇痛作用，并初步探究其镇痛机制。

1 材 料 1.1 实验动物 SPF级雌性未孕Wistar大鼠80只，周龄11周，体重250±10g；由上海市西普尔－必凯实验动物有限公司提供，许可证号：SCXK（沪）2008－0016，合格证编号：2008001609261。

1.2 药品与试剂 延胡索，白芷，上述中药饮片均购于西安中药饮片厂，批号分别为101124和101208，经本科室鉴定，符合《中国药典》（2010版）项下标准。

苯甲酸雌二醇注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批号：1007091）；缩宫素注射液（马鞍山丰原制药有限公司，批号：101007－1）；元胡止痛片（河南皖西制药股份有限公司，批号：110206）；阿司匹林肠溶片（沈阳奥吉娜药业有限公司，批号：20110703）。

NO试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：201202010）；SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20110416）；MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20110420）；考马亮斯兰蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20110426）。

1.3 仪 器 AUW－200D分析天平，日本岛津制作所；T10b匀浆机，德国IKA集团；RT－9600半自动生化分析仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司；TDL－5C低俗台式离心机，上海安亭科学仪器厂；TGL－16GB高速台式离心机，上海安亭科学仪器厂。

2 实验方法 2.1 实验样品的制备 按照2010版《中国药典》（一部）中元胡止痛片项下方法分别制备延胡索提取物和白芷提取物。称取延胡索药材1333g，白芷药材667g，分别采用60%乙醇浸泡24h，加热回流2次，第1次3h，第2次2h。将提取液浓缩得延胡索提取物干膏253.9g，白芷提取浸膏142.5g。

2.2 动物分组 将260±10g雌性未孕 Wistar大鼠80只，随机分为10组，每组8只。分别为Ⅰ正常组，Ⅱ模型对照组，Ⅲ元胡止痛片组（0.698g／kg／d），Ⅳ 延胡索提取物组（0.077g／kg／d），Ⅴ白芷提取物组（0.137g／kg／d），Ⅵ提取物合用组（延胡索提取物0.077g／kg／d＋白芷提取物提取物0.137g／kg／d）；Ⅶ延胡索乙素组（0.07g／kg／d），Ⅷ欧前胡素组（0.025g／kg／d），Ⅸ主成分合用组（延胡索乙素0.07g／kg／d＋欧前胡素0.025g／kg／d），Ⅹ对照组（阿司匹林0.3g／kg／d）。

2.3 催产素所致痛经模型的建立 除空白对照组外，其余各组动物连续10d于每日上午8时皮下注射（s.c.）苯甲酸雌二醇注射液（第1天，第10天给予2.5mg／kg，第2到9天给予1mg／kg），空白对照组s.c.相应剂量注射用大豆油。在给予苯甲酸雌二醇第4天开始给药，各组均灌胃给予受试药，1次／d，连续7d，模型和对照组给予等体积生理盐水。最后1次灌胃40min后，腹腔注射（i.p.）催产素20U／kg。记录扭体潜伏期，30min内扭体次数，计算扭体发生率。扭体发生率%＝（各组发生扭体动物数／各组实验动物数）×100%。

2.4 血清及子宫组织中MDA、SOD活性检测 扭体计数后，大鼠腹腔注射20%乌拉坦（3.0mL／kg）麻醉后，腹主动脉取血3mL，制备血清，测定血清中丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）的活性。迅速剥离子宫，精密称取0.5g左右，加0.9%氯化钠溶液制备成10%子宫组织匀浆，离心后按试剂盒说明书要求分别测定MDA含量及SOD活性。

3 结 果 3.1 元胡止痛方对痛经模型大鼠的干预作用 由表1结果说明，与模型对照组比较，其余各给药组均具有明显镇痛效果，以白芷提取物组，提取物合用组及主成分合用组最为显著。元胡止痛片组，白芷提取物组，提取物合用组及主成分合用组能明显延长疼痛潜伏期。

表1 元胡止痛方对痛经模型大鼠的干预作用

3.2 对大鼠子宫组织及血清SOD活性的影响 图1结果表明，与正常对照组比较，模型对照组子宫组织SOD活性降低（P＜0.05）；血清SOD活性显著降低（P＜0.01）；与模型对照组比较，Ⅳ延胡索提取物组组织中SOD活性变化无统计学意义；Ⅶ延胡索乙素组子宫组织SOD活性升高（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片组，Ⅴ白芷提取物组，Ⅵ提取物合用组，Ⅷ欧前胡素组，Ⅸ有效成分合用组，Ⅹ阳性对照组子宫组织SOD活性均显著升高（P＜0.01）；Ⅹ阳性对照组血清SOD活性变化无统计学意义（P＞0.05）；Ⅵ提取物合用组，Ⅶ延胡索乙素组血清SOD活性升高（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片组，Ⅳ延胡索提取物组，Ⅴ白芷提取物组，Ⅷ欧前胡素组，Ⅸ有效成分合用组血清SOD活性显著升高（P＜0.01）。

图1 元胡止痛片对痛经模型大鼠子宫组织及血清SOD活性的影响

3.3 对痛经模型大鼠子宫组织及血清MDA含量的影响

图2结果表明，与正常对照组比较，模型对照组子宫组织和血清MDA含量显著升高；与模型对照组比较，各给药组子宫组织MDA含量显著降低（P＜0.01）；Ⅶ延胡索乙素组血清MDA含量变化无统计学意义；Ⅳ延胡索提取物组，Ⅷ欧前胡素组，Ⅹ阳性对照组血清 MDA含量降低（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片组，Ⅴ白芷提取物组，Ⅵ提取物合用组，Ⅸ有效成分合用组血清 MDA含量显著降低（P＜0.01）。

图2 元胡止痛片对痛经模型大鼠子宫组织及血清MDA含量的影响

4 讨 论 传统中药元胡止痛方含延胡索、白芷两味药材，二者相须为伍，行气定痛。其中延胡索主要有效成分为延胡索乙素，白芷主要有效成分为欧前胡素，故探讨延胡索提取物、白芷提取物、延胡索乙素＋欧前胡素对大鼠痛经治疗作用差异，藉此阐明元胡止痛方的配伍原理。本实验结果证实，延胡索乙素和欧前胡素均能明显延长痛经模型大鼠疼痛潜伏期，降低扭体次数，表现明显镇痛作用［4］，其中主成分配伍组的效果优于单用，提示延胡索乙素和欧前胡素主成分配伍具有协同作用，其镇痛疗效优于元胡止痛片，但低于延胡索和白芷提取物配伍组；提示分别源自延胡索和白芷中的延胡索乙素、欧前胡素应该是元胡止痛方中起镇痛作用的二个主要“中药分子”，然而它们不是二味中药材中唯一镇痛的中药分子。由此说明，中药对证治疗的配伍原理十分复杂，阐明中药治病的物效基础的研究任重而道远。

据报道［5，6］原发性痛经会导致脂质过氧化的加速升高，MDA作为脂质做氧化的最终产物，其水平的提高与痛经相关。在本实验中观察到，由缩宫素造成的痛经模型大鼠血清和子宫组织中抗氧化酶（SOD）的活性下降，MDA的含量升高，与文献报道［7，8］的结果一致。痛经时各种抗氧化酶活性相应降低，激起自由基的连锁、增生反应，形成一系列的脂质自由基及其降解产物，从而进一步引起细胞膜的流动性降低，通透性增高，线粒体肿胀，溶酶体破坏及溶酶体酶的释放，更进一步加重子宫内膜的损伤，使痛经发生并加剧。本实验结果表明元胡止痛片可以明显增强子宫组织及血清中SOD活性，减少自由基及其降解产物－MDA的含量，消除体内过氧化氢及脂质过氧化物，阻断活性氧自由基对机体的进一步损伤，调节子宫内膜缺血时细胞内的氧化应激状态，保护生物膜，包括细胞膜、细胞器膜上多烯脂肪酸、细胞骨架及其他蛋白质免受自由基攻击，从而达到治疗或缓解痛经的作用。白芷提取物及欧前胡素显著提高子宫组织及血清中SOD活性，降低MDA含量，与元胡止痛片一致，提示作用于氧化应激通路可能是欧前胡素的镇痛机制，但是延胡索提取物对子宫组织SOD活性影响无统计学意义，延胡索乙素对血清MDA含量影响无统计学意义，提示延胡索乙素可能通过其他途径与欧前胡素协同镇痛。

［1］王四旺.“分子中药学”内涵与现代中医药［J］.亚太传统医药，2008，4（3）：9－12.

［2］王四旺.“中药分子”与“分子中药”［J］.第四军医大学学报，2008，29（18）：1633－1636.

［3］嵇 波，张露芬，朱 江，等.痛经模型建立和评价方法的思考［J］.中国药理学通报，2008，24（6）：711－714.

［4］方 玲，朱新冰，尹 菊，等.经前三剂止痛方治疗实验性痛经模型大鼠作用机制研究［J］.天津中医药，2010（1）：46－49.

［5］Dikensoy E，Balat O，Pence S，et al.Malondialde－hyde，nitric oxide and adrenomedullin levels in patients with primary dysmenorrhea［J］.Obstet Gynaecol Res，2008，6（34）：1049－53

［6］Yeh M L，Chen H H，So E C，et al.A study of serum malondialdehyde and interleukin－6levels in young women with dysmenorrhea in Taiwan［J］.Life Sci，2004，75（6）：669－673.

［7］刘健鸿，姚 凝，裴培田，等.舒经玫瑰胶囊对小鼠原发性痛经血清SOD、OFR影响实验研究［J］.中华中西医学杂志，2004，2（6）：1－2.

［8］裴培田，王 昕，赵一梅，等.舒经玫瑰胶囊对小鼠原发性痛经 MDA、Ca2＋的影响［J］.中国中医药信息杂志，2003，10（5）：31－32.