高压液相色谱检测糖尿病患者尿白蛋白的应用
2013-11-20史伟峰李燕梅
史 梅, 史伟峰, 李燕梅
(常州市第一人民医院检验科,江苏常州213003)
近年来,尿白蛋白应用日趋广泛[1],正逐渐成为尿液蛋白化学的重要检测项目。除作为传统意义上的肾脏损伤的诊断及检测指标外,也被用于糖尿病[2]并发症、心血管疾病危险因子的早期诊断和监测等。尿白蛋白检测的名称曾一度被称为尿微量白蛋白检测。近来国际相关专家提议规范的名称应采用尿白蛋白检测[3]。近期发现糖尿病(可能也包括心血管病、高血压)患者尿中的一部分白蛋白用常规的免疫化学检测手段不能检出,且在尿中出现得比较早,这种蛋白暂且被命名为免疫化学非反应性白蛋白(immunochemically nonreactive urinary albumin,INUA)。INUA 目前已引起极大关注。为了准确检测尿白蛋白,提早检出异常尿白蛋白,我们改进尿白蛋白的检测方法,尝试用高效液相色谱法(HPLC)检测尿总白蛋白,将其与临床常规免疫方法进行比较,并初步应用于临床样本的检测。
材料和方法
一、对象
选择常州市第一人民医院内分泌科患者糖尿病(DM)患者85例,男40例,女45例,年龄20~88岁,收集24h尿液。正常对照组40名,男19名,女21名,年龄21~82岁,为常州市第一人民医院健康体检人群,排除DM、肾脏疾病、高血压、心血管、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病,年龄、性别组成与DM组匹配。样本收集后冻存于-70℃待检。
二、方法
每例样本分别采用HPLC和免疫比浊法测定尿白蛋白。
HPLC参照文献[4]进行检测。Agilent 1200色谱仪,Agilent Zorbax oligo 80 mm×6.2 mm、5μm column色谱柱,流动相为乙腈∶H2O=93∶7,0.1%TFA,柱温40 ℃,检测波长210 nm,流速0.5 mL/min,进样量 10 μL,白蛋白标准品(sigma公司,产品号p0914)。
免疫比浊法(免疫散射比浊法)采用BECKMAN-COULTER IMMAGE 800免疫比浊仪及配套试剂(贝克曼库尔特公司)。……
